CD4(抗体)的应用

背景^[1-3]

CD4(抗体)是一类可以特异性结合CD4的多克隆抗体，主要用于体外检测CD4的免疫学实验。CD4(抗体)经常用于流式细胞术和免疫荧光应用，以识别表达CD4分子的免疫细胞亚群。已知表达CD4表面标志物的细胞包括胸腺细胞、成熟T细胞的特定亚群、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞和NKT细胞。

CD4细胞是人体免疫系统中的一种重要免疫细胞，CD4主要由辅助T(Th)细胞表达，是Th细胞TCR识别抗原的受体，与MHCⅡ类分子的非多肽区结合，参与Th细胞TCR识别抗原过程;CD4也是HIV的主要受体，由于艾滋病病毒攻击对象是CD4细胞，所以其检测结果对艾滋病诊断、治疗效果的判断和对患者免疫功能的判断有着重要作用。

CD4(抗体)免疫组化

CD4-T淋巴细胞是人体免疫系统中一种重要的免疫细胞，简称为CD4细胞。T淋巴细胞属于白细胞中的淋巴细胞类，在免疫系统中扮演很重要的角色。人体内有二种主要的T淋巴细胞，其中一种就称为CD4细胞，在T细胞的表面。这些CD4细胞又称为免疫系统的「辅助手」(helper)，能指挥身体对抗微生物，例如病毒。由于HIV的攻击对象正是人体的CD4细胞，因此CD4记数能够直接反映人体免疫功能，是提供HIV感染患者免疫系统损害状况最明确的指标。正常成人的CD4细胞为每立方毫米500~1600个，艾滋病病毒感染者的CD4细胞可能会出现进行性或不规则性下降，提示感染者的免疫系统受到了严重损害，当CD4细胞小于每立方毫米200个时就可能会发生多种严重性机会性感染或肿瘤。

应用^[4][5]

用于混合抗原检测HIV抗体方法及CD4 C868T单核苷酸多态性与HIV-Ⅰ型易感性的研究

1. 以四种特异性多肽抗原HIV Gp41、Gp120、Gp36和p24蛋白为主要原料，调整各多肽抗原比例合适比例，以ELISA原理为基础，制备成检测HIV抗体试剂盒。2.对自制试剂盒进行相关的性能验证。3.研究CD4C868T单核苷酸多态性在广西HIV‐Ⅰ型感染人群中的分布状况，并分析广西人群CD4C868T单核苷酸多态性与HIV‐Ⅰ型易感性的相关性，为预防广西HIV‐Ⅰ型感染以及治疗提供理论基础。

方法;采用改良过碘酸钠氧化法制备酶标抗原，用包被缓冲液配制不同浓度的混合多肽抗原液，包被聚苯乙烯板孔，采用棋盘滴定法选择合适的抗原包被浓度及酶标抗原工作浓度，对检测系统进行固相抗原与抗体结合时间，酶结合物作用时间及显色时间进行优化，用优化后的方案对试剂盒进行相关的性能验证。选取HIV高发区广西的101例HIV‐Ⅰ型患者（艾滋病组）和102例健康体检者（对照组），采用聚合酶链反应（PCR）方法及DNA测序法，检测CD4基因C868T位点（rs28919570C/T）多态性，用χ2检验比较基因型和等位基因型分布频率在艾滋病组和对照组间的差异，logstic回归分析计算比值比（Oddsratios，OR）和95%可信区间（Confidence Intervals，CI），并以性别和年龄进行校正，对rs28919570C/T基因多态性和HIV‐Ⅰ患者的易感性进行关联分析。以上统计均采用SPSS16.0软件进行分析。

结果1.经过棋盘滴定法选择，混合抗原的包被浓度为5ug/ml，酶标抗原工作浓度为1:160。

2. 经过对检测系统进行优化，得出固相抗原与抗体结合作用时间为60min，酶结合物作用时间为45min，显色时间为15min；试剂盒的敏感性为97.2%，特异性为98.6%；试剂盒的主要活性成分在25℃室温放置一周及4℃条件下放置一个月或者三个月之后，质量未发生明显改变，试剂盒的稳定性良好。

3. 艾滋病组和对照组在性别和年龄组成上的差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。艾滋病组和对照组rs28919570C/T位点基因型符合Hardy‐weinberg平衡，所检测的样本具有代表性和可比性。

4. 本研究观察到rs28919570C/T位点共有CC、CT、TT三种基因型，三个基因型在广西人群HIV‐1感染组和对照组中分布频率的差异无统计学意义（P＞0.05）。与CC基因型相比，CT基因型和HIV‐1感染风险无相关性（P＞0.05），TT基因型和HIV‐1感染风险无相关性（P＞0.05），尚不能认为CD4rs28919570C/T位点的基因多态性与广西人群HIV‐1感染易感性有关。

5. rs28919570C/T位点三个基因频率在对照组中的分布与北京汉人、日本东京人和美国德克萨斯州休斯敦印第安人群的研究结果较类似，与美国西南部非洲人、尼日利亚伊巴丹的约鲁巴人的研究结果差异较大。

6.无论是在男性人群中还是在女性人群中，CD4rs28919570C/T位点的基因多态性与HIV‐1感染风险无相关性（P＞0.05）。

参考文献

[1]A Systematic Review of Microfinance-Based Interventions for HIV/AIDS Prevention[J].Arrivillaga,Marcela,Salcedo,Juan Pablo.AIDS Education and Prevention.2014(1)

[2]Manipulation of dendritic cell function by viruses[J].Anthony L Cunningham,Heather Donaghy,Andrew N Harman,Min Kim,Stuart G Turville.Current Opinion in Microbiology.2010(4)

[3]Infant CD4 C868T polymorphism is associated with increased human immunodeficiency virus（HIV‐1）acquisition[J].R.Y.Choi,C.Farquhar,J.Juno,D.Mbori‐Ngacha,B.Lohman‐Payne,F.Vouriot,S.Wayne,J.Tuff,R.Bosire,G.John‐Stewart,K.Fowke.Clinical＆Experimental Immunology.2010(3)

[4]Rapid detection of HIV-1 p24 antigen using magnetic immuno-chromatography（MICT）[J].Shon Workman,Susan K.Wells,Chou-Pong Pau,S.Michele Owen,X.Fan Dong,Ron LaBorde,Timothy C.Granade.Journal of Virological Methods.2009(1)

[5]吴君荣.混合抗原检测HIV抗体方法及CD4 C868T单核苷酸多态性与HIV-Ⅰ型易感性的研究[D].广西医科大学,2014.