MUG培养基的应用

背景^[1-3]

MUG培养基主要用于生活饮用水及其水源水中大肠菌群和大肠埃希氏菌的同时检测。目前我国对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生学评价，检测的指标为大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群（耐热大肠菌群），以这些指标作为粪便污染的指示菌。固定底物技术酶底物法是比较快速简便的检测方法，该方法使用的培养基为MMO-MUG培养基。

原理：固定底物技术酶底物法采用大肠菌群细菌能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG使培养液呈黄色，以及大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌。

MUG培养基

成分：胨10g、磷酸二氢钾0.9g、硫酸铵5g、磷酸氢二钠（无水）6.2g、硫酸锰0.5mg、亚硫酸钠40mg、硫酸锌0.5mg、亚硫酸钠40mg、硫酸镁0.1g、MUG75mg、氯化钠10g、水1000ml,氯化钙50mg。

制法：将干燥成分加入水中，充分混匀，加热溶解，103.43 KPa（121℃，15 lb）高压灭菌15 min，最终pH为6.8±0.2。在无菌操作条件下倾倒直径50 mm平板备用。倾倒好的平板在4℃条件下可保存两个星期。

本培养基也可以不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2mL~3mL于灭菌吸收垫上，再将滤膜置于培养垫上培养。

应用^[4][5]

用于水产品中大肠埃希氏菌和大肠菌群快速检测技术研究

大肠埃希氏菌（Escherichia coli）和大肠菌群（Coliforms）都是判断水、药品、食品等是否被粪便污染的重要微生物指标。检测大肠埃希氏菌和大肠菌群的常规方法存在耗时长、灵敏度低、特异性差和难于检测到低活性或活的非可培养菌等缺点，而基于分子生物学技术、免疫学技术、酶学技术等的三种快速检测技术具有灵敏度高、特异性强、检测快捷等优势，尤其是酶学技术的快速、经济，非常适合水产品中大肠埃希氏菌和大肠菌群的快速检测。

在此基础上，用单管定量检测技术和传统方法对实验室制备的菌悬液、天然海水、水产品中的大肠埃希氏菌和大肠菌群进行了定量检测，比较2种方法的优缺点和检测结果的可比性，以评估单管定量检测技术的应用前景。

具体内容如下：通过研究培养温度、培养液pH值对大肠菌群生长和培养液吸光度值的影响，确定42℃，培养液pH值7.0～7.5为大肠菌群酶解ONPG产物的吸光度值检测的条件；通过研究培养时间和接种菌浓度与培养液吸光度值的关系，建立起基于分光光度法的大肠菌群单管定量检测技术。通过与平板菌落计数法和可能数法比较发现单管定量检测法的相对标准偏差小于这两种常用的方法，而且更为快速、经济，适合用于大肠菌群的定量检测。

利用MUG单管定量检测方法和大肠埃希氏菌多管发酵法对实验室制备的菌悬液、天然海水、水产品中的大肠埃希氏菌进行了定量检测，并比较2种方法的优缺点和检测结果的可比性。检测结果表明：MUG单管定量检测法与大肠埃希氏菌多管发酵法对菌悬液、天然海水、水产品的检测结果没有统计学差异；MUG单管定量检测法检测数据的精确性高于大肠埃希氏菌多管发酵法，而且更为快速、经济，适用于海水和水产品中大肠埃希氏菌的定量检测。

利用ONPG单管定量检测方法和乳糖多管发酵法对实验室制备的标准菌的菌悬液、天然海水和水产品中的大肠菌群进行了定量检测，并比较2种方法的优缺点和检测结果的可比性。

研究结果显示：两种方法对菌悬液、水样的检测结果无统计学差异，ONPG单管定量检测方法检测数据的准确性、精确性和重现性都高于乳糖多管发酵法；ONPG单管定量检测法适合海水中大肠菌群的快速定量检测，具有很好的应用前景，但由于生物组织等的影响，ONPG单管定量检测方法能否应用于水产品的检测有待进一步研究。

综上所述，MUG单管定量检测技术适合用于海水和水产品中大肠埃希氏菌的定量检测；ONPG单管定量检测法适合海水中大肠菌群的快速定量检测，具有很好的应用前景，但由于生物组织等的影响，ONPG单管定量检测方法能否应用于水产品的检测有待进一步研究。

参考文献

[1]Evaluation of a new medium for the enumeration of total coliforms and Escherichia coli in Japanese surface waters[J].H.Kodaka,S.Mizuochi,M.Saito,H.Matsuoka.Journal of Applied Microbiology.2007(4)

[2]Comparison of an automated Borrelia indirect chemiluminescent immunoassay（CLIA）with a VlsE/C6 ELISA and Immunoblot[J].K.Riesbeck,B.Hammas.European Journal of Clinical Microbiology＆Infectious Diseases.2007(7)

[3]Novel indirect enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）method to detect Total E.coli in water environment[J].Na Wang,Miao He,Han-Chang Shi.Analytica Chimica Acta.2007(2)

[4]Rapid PCR detection of enterohemorrhagic Escherichia coli（EHEC）in bovine food products and feces[J].Jay L.E.Ellingson,Jeff J.Koziczkowski,Jennifer L.Anderson,Steve A.Carlson,Vijay K.Sharma.Molecular and Cellular Probes.2005(3)

[5]张小东.水产品中大肠埃希氏菌和大肠菌群快速检测技术研究[D].集美大学,2009.