弧菌显色培养基的应用

背景^[1-3]

弧菌显色培养基用于弧菌的显色培养，副溶血性弧菌显蓝色，霍乱弧菌显红色，其它弧菌显红色或无色。

副溶血性弧菌显色培养基是莱耀生物公司改良的培养基，用于食品、海产品、病人粪便样品和水产品中副溶血性弧菌的快速检测。副溶血性弧菌显蓝绿色至蓝色，其它弧菌显无色；其它细菌显黄色或无色，且细菌菌落很小。本培养基的特异性高，可以克服TCBS培养基引起的假阴性结果，是一种很理想的快速检测培养基。

弧菌显色培养基

用法：称取本品18.46g加入200ml蒸馏水，加热煮沸溶解并不停搅拌，加热10-20分钟。冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿。

注意：制备好的培养基一定要保持表面干燥，可在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时。

操作步骤：

1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液；

2、取1ml样品液加入9mlSCPB肉汤或碱性蛋白胨水中，37℃增菌培养18-24小时；

3、用3mm接种环取1环增菌液，划线接种到副溶血性弧菌显色培养基上，做2个平板；

4、37℃培养18-24h，溶血性弧菌显蓝色至蓝绿色，霍乱弧菌和其它弧菌显无色，其它细菌显黄色或无色且菌落很小；

5、对可疑菌落可划线接种到营养琼脂平板上，36±1℃培养12-16小时，挑取单菌落做副溶血性弧菌全套生化试验。

应用^[4][5]

用于3种致病性弧菌选择性鉴别培养基的研制

以霍利斯弧菌特有的酶系统及其代谢特点和对某些特定抑菌成分的抵抗力为基础,设计研制了霍利斯弧菌选择性鉴别培养基（VhDM）。试验中对VhDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。

结果显示：VhDM对霍利斯弧菌具有较好的选择性和特异性；用VhDM在36±1℃培养16h-24h,霍利斯弧菌菌落为黄色；其它各种弧菌及非弧菌属致病菌菌落呈红色或未形成有效的可见菌落；VhDM对霍利斯弧菌的出菌效率与嗜盐琼脂相比为（90.65±1.72）%；检出限为101cfu/mL:因此,VhDM对海产品中霍利斯弧菌分离鉴别与检测是可行的,且具有操作简便、经济、结果易于观察等优点。

河弧菌选择性鉴别培养基的研制基于河弧菌的基础营养和特殊生态环境需求,优化了其增菌培养基及培养条件。通过单因素试验结合响应面组合试验得到如下结果：培养基组成成分为混合蛋白胨2.24%（胰蛋白胨：鱼蛋白胨为1：3）、酵母浸膏0.204%、NaCl1.81pH8.0；培养温度为36±1℃。经过8h增菌后,该培养基的菌液浓度是GB/T4789.7-2008中规定方法的碱性蛋白胨水（APW）增菌菌液浓度的1.59倍,增菌效果明显。以河弧菌特有的酶系统及其代谢特点和对某些特定抑菌成分的抵抗力为基础,设计研制了河弧菌选择性鉴别培养基（VfDM）。

试验中对VfDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。结果显示：VfDM对河弧菌具有较好的选择性和特异性；用VfDM在36±1℃培养18h-24h,河弧菌菌落为深褐色；其它各种弧菌及非弧菌属致病菌菌落呈红色或未形成有效的可见菌落；VfDM对河弧菌的出菌效率与嗜盐琼脂相比为（92.80±2.88）%；检出限为101cfu/mL;因此,VfDM对海产品中河弧菌分离鉴别与检测是可行的,且具有操作简便、经济、结果易于观察等优点。

弗尼斯弧菌选择性鉴别培养基的研制基于弗尼斯弧菌的基础营养和特殊生态环境需求,优化了其增菌培养基及培养条件。通过单因素试验结合响应面组合试验得到如下结果：培养基组成成分为混合蛋白胨2.08%（胰蛋白胨：鱼蛋白胨为1：3）、酵母浸膏0.221%、NaCl1.94%、pH8.5；培养温度为36±1℃。经过8h增菌后,该培养基的菌液浓度是GB/T4789.7-2008中规定方法的碱性蛋白胨水（APW）增菌菌液浓度的1.48倍,增菌效果明显。以弗尼斯弧菌特有的酶系统及其代谢特点和对某些特定抑菌成分的抵抗力为基础,设计研制了弗尼斯弧菌选择性鉴别培养基（VfuDM）。

试验中对VfuDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。结果显示：VfuDM对弗尼斯弧菌具有较好的选择性和特异性；用VhDM在36±1℃培养18h-24h,弗尼斯弧菌菌落为黄色；其它各种弧菌及非弧菌属致病菌菌落呈蓝色或未形成有效的可见菌落；VfuDM对弗尼斯弧菌的出菌效率与嗜盐琼脂相比为（92.98±2.58）%;检出限为101cfu/mL;因此,VfuDM对海产品中弗尼斯弧菌分离鉴别与检测是可行的,且具有操作简便、经济、结果易于观察等优点。

参考文献

[1]Rapid detection of Vibrio metschnikovii in aquatic products by real-time PCR[J].J.Cao,J.Xu,Q.Zheng,P.Yan.Folia Microbiologica.2010(6)

[2]Simultaneous differential detection of human pathogenic and nonpathogenic Vibrio species using a multiplex PCR based on gyrB and pntA genes[J].C.S.J.Teh,K.H.Chua,K.L.Thong.Journal of Applied Microbiology.2010(6)

[3]Vibrio parahaemolyticus:A concern of seafood safety[J].Yi-Cheng Su,Chengchu Liu.Food Microbiology.2007(6)

[4]Comparative evaluation of different chromogenic/fluorogenic media for detecting Escherichia coli O157:H7 in food[J].Mammad Manafi,Birgit Kremsmaier.International Journal of Food Microbiology.2001(2)

[5]陈洁.3种致病性弧菌选择性鉴别培养基的研制[D].浙江工商大学,2012.