恩替卡韦一水合物新合成工艺

背景技术

恩替卡韦一水合物（Entecavir)，化学名为2_氨基_9_[ (1S，3R，4S) _4_羟基-3-羟甲基-2-亚甲基环戊烷]-1，9- 二氢-6H-嘌呤-6酮一水合物，是由百时美施贵宝公司（Bristol -Myers Squibb)自主研发的一类环戊烷鸟苷类似物，系乙肝病毒抑制剂。 本品已于2005年3月获得美国食品药品管理局（FDA)上市批准，其片剂商品名为博路定 (BaraclUde)，2006年初在中国全面上市。适用于病毒复制活跃、丙氨酸氨基转移酶（ALT) 持续升高或有肝脏组织学显示活动性病变的成人慢性乙型肝炎患者。

恩替卡韦是一种强效选择性鸟嘌呤核苷类似物，具有显著的抗乙型肝炎病毒HBV 的活性。临床研究证实，恩替卡韦较拉米夫定具有更加显著的病毒抑制作用，几乎没有副作用，且耐药性很低，在治疗慢性乙型肝炎药物中被认为有很好的临床应用用前景。

恩替卡韦是一种能有效抑制乙肝病毒复制的脱氧鸟嗓吟核奋类似物，对肝脏病毒的复制从起始阶段、逆转录期和DNA合成期的三个阶段起抑制作用。在离体肝细胞的研究中，恩替卡韦能定向为肝细胞吸收并磷酸化成一、二、三磷酸酯，其1〜25 μ mol/L时在肝脏的吸收成线性相关，半衰期为15小时。与其它核苷类化合物如拉米夫定、阿德福韦、泛昔洛韦等相比较，恩替卡韦能更有效地磷酸酯化，这或许正是其具有更高抗HBV活性的原因之一。恩替卡韦在细胞内易被细胞酶逐步磷酸化为其活性代谢物恩替卡韦三磷酸（ETV-TP)， 后者为HBV DNA的复制。恩替卡韦抑制HBV复制活性最强，IC50为0. 00375 μ mol/L,抑制细胞的毒性CC5tl为30 μ mol/L,治疗指数（IC5(1/CC5(1)高达8000。其在DHBv感染的鸭肝细胞培养内抑制DHBv复制的IC5tl为0. 00013 μ mol/L,比拉米夫定高1000倍，两者在细胞培养内显示抗HBV相加作用。在WHV感染的土拨鼠肝炎模型及DHBV感染的鸭肝炎模型中，恩替卡韦均显示显著的抗两种肝炎病毒的治疗活性。

总之，恩替卡韦不仅有很强的抗HBV的能力，而且长期应用耐药发生率较低，同时还具有剂量小的优点。固此恩替卡韦的研制开发必然会给无数慢性HBV患者带来福音，必然会为HBV的治疗带来新的希望，将具有极其重要的社会意义和经济效益。

本品为白色或类白色结晶粉末，无臭，在二甲基甲酰胺中溶解，甲醇中略溶，乙醇和水中微溶，在乙腈或丙醇中几乎不溶，熔点238〜M0°C (分解），密度为1.81，恩替卡韦一水合物.

该路线以双环戊二烯为原料，经过11步得到恩替卡韦一水合物，操作复杂，对人员素质要求极高，同时收率极低，不适合工业化生产。

发明内容

本发明的目的在于弥补现有技术中存在的不足之处，提供一种工艺生产简单、产品收率大幅度提高的工业化生产工艺。本发明工艺具有成本低廉、污染小、工艺稳定等优点。

本发明的技术工艺如下：

反应步骤为：

a、l的制备

配有短分馏柱（可加入填料)的常压蒸馏装置，接受瓶中加入无水氯化钙，并置于冰水浴中（单体环戊二烯室温聚合，须低温保存），尾接管有干燥塔。向三口瓶中加入双环戊二烯，整个系统微氮气保护，在搅拌下缓慢升温至180°C，保持蒸馏上气口温度不超过 42 0C，最终得单体环戊二烯（低温保存）。

b、2的制备

向反应釜中加入无水二甲苯，去氧化表面金属钠，微氮气保护，搅拌下升温至 120〜150°C，钠溶解，剧烈搅拌，使钠分散成钠沙，停止搅拌，使体系恢复到室温，钠沙固化，抽去表面二甲苯，用适量无水THF置换三次，最后加入无水THF保护，备用。

在微氮气保护下，用冰水浴将四氢呋喃-钠沙降温O〜10°C，将制备好的单体环戊二烯缓慢滴加到四氢呋喃-钠沙体系中，控制温度不超过10°c，滴加毕，撤去冰水浴，自然升温至室温并搅拌约3小时，钠沙基本消耗完，最终得淡红色环戊二烯钠溶液。

C、3 的制备：

将二甲基苯基氯硅烷和无水四氢呋喃加入到反应釜中，微氮气保护下，使体系冷却到-70°C以下，开始滴加2，控制滴加温度在-70°C以下，滴加毕，在-70°C以下保温搅拌约 3小时，TLC检测反应完全，，使其自然升温至0°C，缓慢加入冰水，搅拌，静置分层，有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，正己烷萃取，，无水硫酸钠干燥，65°C下减压浓缩，最后得深黄色油状物3。

d、4 的制备：

将加入3和正己烷的反应釜冷却到-10°C，快速将二氯乙酰氯滴加其中，继续搅拌，将三乙胺和正己烷的混合液缓慢滴加到体系中，温度保持在_5°C以下，滴加毕，在0〜 4°C反应约4小时，然后自然升温至室温8〜10小时（过夜）。TLC检测反应完毕。加入水，室温搅拌30分钟，静置分层，正己烷萃取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠洗涤至中性，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得深色油状物4。

e、5的制备

室温下将4，甲醇，水和三乙胺加入到反应釜中，搅拌均勻。升温至75-80°C，反应 4〜5小时，反应毕，将体系冷却到10°C以下，分批加入碳酸钾，搅拌30分钟，缓慢加入硼氢化钠（注意喷料），缓慢升至室温搅拌8-10小时，使反应完全。此时反应体系PH = 9-10. 向体系中加入水，淬灭反应，搅拌0. 5小时，用浓盐酸将体系调有到PH = 2-3，加乙酸乙酯萃取，分出有机相，饱和食盐水洗涤，合并有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，得黑色粘稠5.

f、6 的制备：

分别将5、无水乙醇和左旋精制氨基物加入反应釜中，室搅拌约1小时，有晶体析出，升温至50-60°C，搅拌5-6小时，降至室温搅拌约3小时，过滤，滤饼用少量无水乙醇洗涤，滤饼55 °C下减压干燥10小时，得5浅棕色粉末固体。（HPLC彡93 % )。

g、7 的制备：

室温下向干燥的反应釜中加入甲醇和6，冰盐水浴下，滴加浓硫酸，控制温度在 5°C以下，加完后，自然升温到室温（约20-30°C )，搅拌反应10小时。TLC监测反应进程。 反应结束后，减压蒸除甲醇温度< 50°C (过程中，严格控制真空度和温度，速度要快），蒸干后，冷却到室温。加入乙酸乙酯和水，搅拌5分钟后，用分液漏斗萃取，下面水层再用乙酸乙酯萃取，（水层放入收废水集池）合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液调PH到8-9。如果乳化用布氏漏斗过滤，（在漏斗上加一层硅藻土），滤液用分液漏斗分去水，上层有机相，用饱和食盐水洗涤两次，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去固体硫酸钠。减压浓缩有机相温度 (50°C，，得黑色产物为7。

h、8 的制备：

室温下将7，甲醇和水加入到反应釜中，搅拌均勻。升温至75_80°C，反应3〜4小时，反应毕，将体系冷却到10°c以下，缓慢加入还原剂，缓慢升至室温搅拌6〜7小时，使反应完全。向体系中加入水，淬灭反应，搅拌0. 5小时，用浓盐酸将体系调节到PH = 5〜6，加乙酸乙酯萃取，分出有机相，饱和食盐水洗涤，合并有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，得浅红色粘稠8。

i、9的制备

在氮气保护下，向干燥的反应釜中加入冰醋酸和8，搅拌溶解后，加入乙酸三氟化硼，加热升温反应5〜15小时，溶液变为黑色，反应毕，冷却到室温。向反应瓶中加入甲醇， 冰浴下，用5N氢氧化钾溶液调PH到7〜9，此时为黄色乳状物，再缓慢滴加30%过氧化氢溶液，加毕，撤去冰水浴，在氮气保护下，加热升温到70°C保温反应12小时。反应完成后， 冷却到室温，分批滴加饱和亚硫酸氢钠溶液.加完后搅拌半小时，然后减压回收甲醇温度 60°C左右（注意喷料，蒸馏速度不可太快，浓缩甲醇时有大量泡沫产生）残留物冷却到室温后，用冰盐浴冷到0°C，用浓盐酸调PH到2，为黄色液体。向反应瓶中加入乙酸乙酯，搅拌5 分钟后，萃取出乙酸乙酯（可回收套用），若乳化严重，可加少许丙酮，有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩即得浅黄色油状液体9。

j、10 的制备

9在酮的作用下形成缩酮而得10。

k、11 的制备

室温下向干燥的反应釜中依次加入3A分子筛和干燥的二氯甲烷，在氮气保护下， 将反应液冷却到_25°C左右，滴加（-)-DIPT，滴完，控温在-25°C左右搅拌反应20分钟。然后滴加Ti(i-oft04，滴完，控温在-25°C左右搅拌反应20分钟；接着滴加10和二氯甲烷的混合溶液，滴完，控温在_25°C左右搅拌反应20分钟；然后滴加TBHP溶液，滴完，控温在_25°C左右继续搅拌反应，用TLC监控反应。展开剂=石油醚：乙酸乙酯=2 ： 1(约4小时反应结束，此反应要求严格无水，否则反应不完全）反应完成后，滴加亚硫酸氢钠水溶液，控制内温不超过-10°C，加完后，拆去冷却浴，升温到室温Q0-25°C )搅拌反应1小时。抽滤，（在漏斗上加一层硅藻土），滤液加水，搅拌振勻后，萃取，上面水层用二氯甲烷萃取两次，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤两次，萃取出的有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去固体硫酸钠。减压浓缩有机相温度45 < °C，得25g淡棕色油状物为11。

l、12 的制备：

室温下向反应釜中依次加入2-氨基-6-苄氧鸟嘌呤，一水合氢氧化锂和DMF，通氮气保护下，升温到90°C，搅拌反应，约16小时反应结束。TLC监测反应进程。展开剂=石油醚：乙酸乙酯=2 ： 3。加入乙酸乙酯和饱和食盐水，搅拌5分钟后，过滤，（在漏斗上加一层硅藻土），滤液转入分液漏斗萃取，下面水层再用乙酸乙酯萃取三次，（水层放入收废水集池）合并有机层，上层有机相，依次用50%饱和柠檬酸水溶液洗涤两次，用饱和食盐水洗涤两次，上层有机相，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去固体硫酸钠。浓缩有机温度< 65°C，得棕黑色胶状物，为12粗品.直接用于下步反应。

m、13 的制备

室温下向反应釜中加入干燥的二氯甲烷，通入氮气保护，启动搅拌。加入12，微加热到全溶（约30-32°C )。在氮气保护下，在冰盐浴下加入对甲苯磺酸吡啶盐（PPTS)，加完搅拌5分钟，控制温度在0°C，滴加原甲酸三乙酯，滴加毕，去掉冰盐浴，用温水控制内温在 25°C搅拌反应3小时。TLC监测反应，展开剂=石油醚：乙酸乙酯=2 ： 1。反应完成后， 缓慢加入饱和碳酸钠溶液，加完后，在20-25°C搅拌半小时，然后加入分液漏斗中静止分层， 分出下层有机相；上层水相，用二氯甲烷再萃取一次，上层水相放到收集池。然后合并下层有机相，用水洗涤两次，下层有机相，再用无水硫酸钠干燥，除去固体硫酸钠。浓缩有机相温度< 65°C，然后抽真空2小时，得粘稠状油状物.在氮气保护下将上述油状物转移到500ml 四口烧瓶中，加入乙酸酐搅拌溶解后，再加乙酸、抗氧化剂（BHT)I粒，然后在无水无氧状态下，加热到118-122°C保温反应约30小时。在保温反应过程中，溶液从深棕色变成黑色，TLC 监测反应，反应完成后，开始分级降温。在氮气保护下，当温度降到65°C后，加入水与乙酸乙酯稀释，分离乙酸乙酯层，盐水洗，无水硫酸钠干燥，悬浮固体倾泻，浓缩，固体用冷的乙酸乙酯洗，干燥白色固体13。

η、恩替卡韦一水合物的制备

13，加入1 ： 1四氢呋喃-甲醇，滴入2Ν盐酸在60°C搅拌4. 5h直至原料反应物， 冷却至室温，加入水与乙酸乙酯稀释，剧烈搅拌下用IN氢氧化钠调节pH至7.0，静置，白色固体在有机层，分离两相，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，盐水洗，无水硫酸钠干燥，悬浮固体倾泻，浓缩，固体用冷的乙酸乙酯洗，干燥得恩替卡韦一水合物白色固体。