大鼠尿肌酐(UCR)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠尿肌酐(UCR)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中大鼠尿肌酐（UCR）的含量。

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠尿肌酐（UCR）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠尿肌酐（UCR）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

大鼠尿肌酐(UCR)ELISA试剂盒

样本处理及要求

1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

操作步骤：

1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于血清胱抑素C、尿微量白蛋白/尿肌酐与冠状动脉病变严重程度相关性的探讨研究

分析血清胱抑素C（Cys C）与尿微量白蛋白/尿肌酐（UACR）水平与冠状动脉病变（CAD）严重程度的关系,并探讨其二者对肾功能基本正常患者冠状动脉病变的预测价值。方法:连续入选2019.10～2020.12期间冠状动脉造影（CAG）阳性者270例为研究组,同期行冠状动脉造影正常者80例设为对照组。将研究组270例患者计算SYNTAX评分,基于SYNTAX评分,分为低危组（124例）、中危组（80例）、高危组（66例）。

此外,又基于冠状动脉病变血管支数,分为单支组（93例）、双支组（101例）和三支组（76例）。各组患者均需完善一般临床资料登记和常规生化指标的检测,并对以下肾功能指标进行记录:酶法测定血肌酐（Cr）及尿肌酐、免疫比浊法测定Cys C及尿微量白蛋白、计算UACR及肾小球滤过率（e GFR）,对照不同分组之间肾功能指标情况。

探讨Cys C和UACR与SYNTAX评分及冠状动脉病变支数之间的关系,并进行多支血管病变的Logistic回归分析,探讨Cys C和UACR与冠状动脉多支血管病变之间的关系。结果:比较对照组、低危组、中危组与高危组,四组间血清胱抑素C水平逐渐增高（P<0.05）。尿微量白蛋白/尿肌酐水平,对比对照组、低危组结果在正常范围,无统计学差异,P>0.05;但这2组和中危组、高危组结果对比UACR逐渐增高,P<0.05,即有着显著的统计学差异;对比中、高危组结果逐渐增高,P<0.05;低危低于中危组,中危组又低于高危组,P<0.05,即有显著统计学差异。在血肌酐方面,四组间对比结果皆无明显区别,P>0.05。

肾小球滤过率水平方面对照组高于其余三组,有显著统计学差异（P<0.05）,但对比剩余三组结果无明显差别（P>0.05）。比较单支组,双支组及三支组,在Cys C、UACR方面,对比三组结果逐渐增高（P<0.05）,有统计学差异。三支病变组血Cr水平高于单支、双支病变组,对比有显著统计学差异,P<0.05。e GFR水平三支病变组低于单支、双支病变组,有显著统计学差异,P<0.05。采用Logistic回归法分析:血清胱抑素C（OR=1.220,95%CI 1.095-1.358,P<0.05）和尿微量白蛋白/尿肌酐（OR=1.021,95%CI 1.015-1.028,P<0.05）,其是多支CAD的独立危险因子。将冠状动脉MVD（多支血管病变）当做阳性的评估标准,绘制ROC曲线,血清胱抑素C（AUC=0.659,95%CI 0.594-0.724,P<0.05）,尿微量白蛋白/尿肌酐（AUC=0.820,95%CI 0.771-0.870,P<0.05）。

参考文献

[1]Urine albumin-to-creatinine ratio within the normal range and risk of hypertension in the general population:A meta-analysis.[J].Ren Fei,Li Mingzhu,Xu Hua,Qin Xiaowei,Teng Yanling.Journal of clinical hypertension（Greenwich,Conn.）.2021(7)

[2]Relationship between serum cystatin-c and coronary lesion severity in coronary artery disease patients with a normal glomerular filtration rate[J].Pan Junqiang,Sun Xifeng,Zhang Pengjie,Chen Haichao,Lin Jing.Journal of International Medical Research.2021(1)

[3]Urinary albumin to creatinine ratio within normal range and all-cause or cardiovascular mortality among U.S.adults 1999-2015[J].Inoue Kosuke,Streja Elani,Tsujimoto Tetsuro,Kobayashi Hiroki.Annals of Epidemiology.2020(prep)

[4]High-normal albuminuria is associated with subclinical atherosclerosis in male population with estimated glomerular filtration rate≥60 mL/min/1.73 m2:A cross-sectional study.[J].Kimura Tomoe,Ueno Toshinori,Doi Shigehiro,Nakashima Ayumu,Doi Toshiki,Ashitani Aki,Kawano Reo,Yamane Kiminori,Masaki Takao.PloS one.2019(8)

[5]刘彬彬.血清胱抑素C、尿微量白蛋白/尿肌酐与冠状动脉病变严重程度相关性的探讨[D].中国医科大学,2021.