人绒毛膜滋养层细胞的应用

背景^[1-3]

人绒毛膜滋养层细胞是从人胎盘绒毛中分离得到的，原代冻存。人绒毛膜滋养层细胞特性经alpha-and beta-HCG免疫荧光鉴定，细胞经检测不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母菌和真菌。

胚胎滋养层是早期胚泡的外层遮盖物，并为母亲子宫内膜和发育中胚胎之间提供营养途径。紧贴在子宫壁的滋养层是胚胎着床必不可少的步骤，随后形成胎盘。覆盖着胎盘绒毛的人绒毛膜滋养层细胞提供了母亲循环中氧和营养物质交换的介面。它们合成和释放绒毛膜促性腺激素，胎盘催乳激素和血管生成素，表达CXCR4,CCR5和泌乳刺激素基因家族。在绒毛锚定位点，它们分化成侵袭型并表达CCR1。绒毛膜滋养层细胞的特性及近期发现的滋养层干细胞，使它们成为一个研究细胞分化和器官形成的理想的遗传学平台。

人绒毛膜滋养层细胞

培养条件：

培养基：90%DMEM+10%FBS；温度：37℃；气相：95%空气；5%二氧化碳。

传代：

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:2到1:4；

3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化，消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

应用^[4][5]

用于反式脂肪酸对人绒毛膜滋养层细胞迁移的影响及其机制研究

研究了食品加工过程中产生的两种主要反式脂肪酸,反-9-十八碳烯酸（反油酸）和反-9,反-12-十八碳二烯酸（反亚油酸）对滋养层细胞迁移的影响,并对其作用机制进行了初步探讨,从而为反式脂肪酸影响胎盘发育的研究提供科学依据。

通过对妊娠早期滋养层组织块和滋养层细胞的体外培养,应用组织植块迁移实验、划痕实验和Transwell实验,分析反油酸和反亚油酸对滋养层细胞迁移的影响,结果发现在10～50μmol/L浓度范围内,反油酸和反亚油酸能够明显抑制滋养层细胞的体外迁移,其作用呈现明显的时间依赖性和剂量依赖性。进一步应用蛋白免疫印迹分析,发现反油酸和反亚油酸明显下调滋养层细胞β-catenin蛋白的表达,提示反式脂肪酸抑制滋养层细胞迁移的作用可能与Wnt/β-catenin信号转导通路有关。

明胶酶谱实验分析还发现,反油酸和反亚油酸能够明显抑制滋养层细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的分泌,提示反式脂肪酸对滋养层细胞迁移能力的抑制作用可能与其对MMP-2分泌的影响有关。

应用β-catenin激活剂锂离子,结合组织植块迁移、划痕实验和Transwell实验,发现锂离子能够明显拮抗反油酸和反亚油酸对滋养层细胞迁移的抑制作用;此外,应用β-catenin激活剂锂离子,结合蛋白免疫印迹和明胶酶谱分析,检测到锂离子能够明显拮抗反油酸和反亚油酸对滋养层细胞β-catenin蛋白表达的下调作用和MMP-2分泌的抑制,提示反式脂肪酸可能通过调节β-catenin蛋白的表达及抑制MMP-2的分泌,从而发挥其对滋养层细胞迁移的抑制作用。

综上发现反油酸和反亚油酸能够抑制滋养层细胞的迁移能力,其作用可能与下调β-catenin蛋白的表达而影响该信号转导通路的活化状态,进而抑制MMP-2的分泌有关。

参考文献

[1]Ellagitannins,ellagic acid and their derived metabolites:A review about source,metabolism,functions and health[J].J.M.Landete.Food Research International.2011(5)

[2]Decidual NK cell-derived conditioned medium enhances capillary tube and network organization in an extravillous cytotrophoblast cell line[J].Y.Hu,G.Eastabrook,R.Tan,C.D.MacCalman,J.P.Dutz,P.von Dadelszen.Placenta.2009(3)

[3]Activation of caspase 3 in HepG2 cells by elaidic acid（t18:1）[J].Yumi Kondoh,Teruo Kawada,Reiko Urade.BBA-Molecular and Cell Biology of Lipids.2007(4)

[4]Molecular mechanism of insulin resistance[J].Samir Bhattacharya,Debleena Dey,Sib Sankar Roy.Journal of Biosciences.2007(2)

[5]刘霄.反式脂肪酸对人绒毛膜滋养层细胞迁移的影响及其机制研究[D].大连工业大学,2014.