人胃癌细胞的应用

背景^[1-3]

人胃癌细胞于1979年建系；SGC-7901细胞源自一位56岁女性胃腺癌患者的淋巴结转移灶。RPMI-1640培养12天，细胞开始生长，传代10天；31个月中传代186代。SGC-7901细胞在免疫抑制的ICR小鼠、乳犬皮下移植成功，家兔、乳犬眼前房移植成功；淋巴结转移，从小鼠皮下侵袭至肌层。(STR检测位点同HELA)。

人胃癌细胞

收到后处理：

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。

培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于调控PKM2对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

研究了调控PKM2对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制的探讨。

方法:1.培养人胃癌细胞HGC-27、AGS,并在培养基中分别加入0uM、0.5uM、1uM、2uM、3uM浓度的PKM2抑制剂,CCK-8法检测各浓度PKM2抑制剂对人胃癌细胞增殖的影响。

2. 在胃癌细胞培养基中分别加入0uM、0.5uM、1uM、2uM、3uM浓度的PKM2抑制剂,划痕实验检测不同浓度PKM2抑制剂对人胃癌细胞HGC-27、AGS迁移能力的影响。

3. 在胃癌细胞培养基中分别加入0uM、0.5uM、1uM、2uM、3uM浓度的PKM2抑制剂,Transwell实验检测不同浓度PKM2抑制剂对人胃癌细胞HGC-27、AGS迁移能力的影响。

4. 用携带PKM2 SiRNA的转染试剂转染人胃癌细胞HGC-27、AGS后,通过Western Blot法检测HGC-27、AGS人胃癌细胞中PKM2（丙酮酸激酶M2）蛋白、Bc12（B细胞淋巴瘤基因2）蛋白、Bax（BCL2-Associated X）蛋白表达量的变化。

结果:1.用不同浓度PKM2抑制剂培养HGC-27、AGS胃癌细胞,CCK-8法结果显示:PKM2抑制剂可以抑制HGC-27、AGS胃癌细胞的增殖,且胃癌细胞增殖抑制率与抑制剂浓度成正比。

2. 用不同浓度PKM2抑制剂培养HGC-27、AGS胃癌细胞,划痕实验和Transwell实验结果显示:PKM2抑制剂可以抑制HGC-27、AGS胃癌细胞的迁移能力,且胃癌细胞抑制程度呈浓度依赖性。

3. Western Blot法结果显示:PKM2 SiRNA可以下调胃癌细胞中PKM2、Bcl2蛋白的表达,同时上调其Bax蛋白的表达。

结论:1.PKM2抑制剂能够抑制HGC-27、AGS人胃癌细胞的增殖能力。

2. PKM2抑制剂能够抑制HGC-27、AGS人胃癌细胞的迁移能力。

3. 抑制HGC-27、AGS人胃癌细胞内PKM2蛋白的表达,可影响下游多种效应蛋白如Bc12、Bax蛋白的表达,进而抑制HGC-27、AGS人胃癌细胞的生长。

4.PKM2-Bc12信号通路在参与人胃癌细胞增殖与凋亡中发挥重要调控作用。

参考文献

[1]PKM2 depletion induces the compensation of glutaminolysis throughβ-catenin/c-Myc pathway in tumor cells[J].Haili Wu,Zongwei Li,Peng Yang,Lichao Zhang,Yongsheng Fan,Zhuoyu Li.Cellular Signalling.2014(11)

[2]miR-181b modulates multidrug resistance by targeting BCL2 in human cancer cell lines.[J].Zhu Wei,Shan Xia,Wang Tongshan,Shu Yongqian,Liu Ping.International journal of cancer.2010(11)

[3]Silencing of pkm2 increases the efficacy of docetaxel in human lung cancer xenografts in mice.[J].Shi Hua-shan,Li Dan,Zhang Jing,Wang Yong-sheng,Yang Li,Zhang Hai-long,Wang Xian-Huo,Mu Bo,Wang Wei,Ma Yu,Guo Fu-chun,Wei Yu-Quan.Cancer science.2010(6)

[4]Quantitative proteome analysis of multidrug resistance in human ovarian cancer cell line.[J].Li Sang-Lin,Ye Feng,Cai Wei-Jun,Hu Huai-Dong,Hu Peng,Ren Hong,Zhu Fu-Fan,Zhang Da-Zhi.Journal of cellular biochemistry.2010(4)

[5]黄华聪.调控PKM2对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究[D].南方医科大学,2021.