西伯利亚远志口山酮B的应用

背景及概述^[1]

西伯利亚远志口山酮B可用于远志UPLC测定。远志为远志科远志属植物远志Polygala.tenuifolia Willd.或卵叶远志Polygala.sibirica L.的干燥根，其味苦、辛、温，归心、肾、脾经，具有安神益智、祛痰、消肿之功效，用于心肾不交引起的失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚等。市售远志药材品质参差不齐，polygalaxanthoneⅢ、3,6'-disinapoyl sucrose含量总体偏低，药材质量难以控制。近年来，针对远志质量评价等方面的研究也多为个别成分为指标的含量测定分析。姜勇等开展了远志指纹图谱研究，但所建立的HPLC指纹图谱检测时间为80min，耗时长，损耗试剂多，不利于高通量分析，同时存在共有峰数目较少、缺乏共有峰定性等问题。综上所述，建立一种全面、快速的远志药材质量评价方法很有必要。

UPLC测定方法^[1]

一种远志药材有效成分的含量检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤1、对照品溶液制备：取西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、西伯利亚远志口山酮B、球腺糖A、远志口山酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖，甲醇定容制成混合对照品溶液；

步骤2、供试品溶液制备：取远志药材含水低级醇提取后，滤过，得到供试品溶液；

步骤3、将对照品溶液和供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算供试品中的有效成分含量。

其中，步骤1所述混合对照品溶液，其中各组分的含量分别为：

每1ml含西伯利亚远志糖A5 35-40ug、西伯利亚远志糖A6 42-52ug、西伯利亚远志口山酮B20-26ug、球腺糖A 25-31ug、远志口山酮Ⅲ24-30ug、3,6'-二芥子酰基蔗糖234-286ug的混合对照品溶液，优选的，西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、西伯利亚远志口山酮B、球腺糖A、远志口山酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖的含量分别为39.8mg/L、47.7m g/L、23.9mg/L、28.2mg/L、27.4mg/L、263mg/L的混合对照品溶液。

其中，步骤2所述含水低级醇为甲醇或乙醇的水溶液。所述的提取方法包括回流法或超声波提取法。

优选步骤2供试品溶液配制方法如下：取远志药材用30-100％低级醇超声提取10-60分钟或回流提取2-3次每次1-1.5小时。其中的含水低级醇选自30％-100％甲醇或30％-100％乙醇溶液，优选30％-100％甲醇，70％甲醇溶液超声提取30分钟。。

步骤3中所述的超高效液相色谱条件：UPLC色谱仪C18色谱柱、流动相酸水-乙腈溶液梯度洗脱、流速0.3-0.4mL/min、检测波长300-330nm、柱温25-35℃。

所述的梯度洗脱条件为0～1min，10％乙腈；1～2.5min，10％～14％乙腈；2.5～4min，14％～16％乙腈；4～9min，16％～25％乙腈；9～12min，25％乙腈；12～14min，25％～27％乙腈；14～16min，27％～30％乙腈；16～18min，30％～39.8％乙腈；18～21min，39.8％～40％乙腈；21～23min，40％～60％乙腈；23～24min，60％～100％乙腈；24～26min，100％～10％乙腈。

经过测定，所述远志药材中，西伯利亚远志糖A5含量0.4-1.7mg/g、西伯利亚远志糖A6含量0.4-1.6mg/g、西伯利亚远志口山酮B含量0.5-1.5mg/g、球腺糖A含量0.2-0.8mg/g、远志口山酮Ⅲ含量0.3-1.0mg/g、3,6'-二芥子酰基蔗糖含量1.9-6.9mg/g。

其中，步骤3、优选UPLC C18色谱柱为T3键合色谱柱，流速0.4mL/min、检测波长320nm、柱温30℃。

本发明进一步提供一种远志药材超高效液相指纹图谱建立方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：

步骤1、供试品溶液制备：取多批次远志药材含水低级醇提取后，滤过，得到供试品溶液；

步骤2、将供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图，对所有色谱图相似度评价得到含有37个共有峰的远志药材的参照指纹图谱

步骤3、采用质谱分析法；并对37个共有峰进行归属，鉴定出37个共有峰中的33个峰；

其中，超高效液相色谱的色谱条件如下：

UPLC色谱仪C18色谱柱、流动相酸水-乙腈溶液梯度洗脱、流速0.3-0.4mL/min、检测波长300-330nm、柱温25-35℃。

所述的梯度洗脱条件为0～1min，10％乙腈；1～2.5min，10％～14％乙腈；2.5～4min，14％～16％乙腈；4～9min，16％～25％乙腈；9～12min，25％乙腈；12～14min，25％～27％乙腈；14～16min，27％～30％乙腈；16～18min，30％～39.8％乙腈；18～21min，39.8％～40％乙腈；21～23min，40％～60％乙腈；23～24min，60％～100％乙腈；24～26min，100％～10％乙腈。

其中，所述的对共有峰进行归属，采用质谱分析法，其中质谱条件如下：采用电喷雾离子源ESI，负离子模式，质量扫描范围100-2000Da；毛细管电压为2.5-3kV；锥孔电压为10-50V；离子源温度为80-120℃；雾化温度为200-300℃；载气流速为400-1000L/h，碰撞能量(CE)40-100V,优选60-80V。

优选采用电喷雾离子源(ESI)，负离子MSE模式，雾化气体为高纯度氮气(N2)，碰撞气体为高纯度氩气(Ar)。质量扫描范围100～2000Da；毛细管电压为3kV；锥孔电压为40V；离子源温度为120℃；雾化温度为300℃；载气流速为800L/h，碰撞能量(CE)60～80V；采用亮氨酸-脑啡肽进行精确质量校正([M-H]-＝554.2615)。

参考文献

[1] [中国发明,中国发明授权] CN201511010555.5 一种远志UPLC测定方法