7-溴-1H-吡咯并[2,3-B][1,4]恶嗪-2(3H)-酮的制备和应用

背景及概述^[1]

7-溴-1H-吡咯并[2,3-B][1,4]恶嗪-2(3H)-酮是一种有机中间体，可由5-溴-2-氯-3-硝基吡啶为原料先制备2-((5-溴-3-硝基吡啶-2-基)氧基)乙酸甲酯，然后关环得到7-溴-1H-吡咯并[2,3-B][1,4]恶嗪-2(3H)-酮。

制备^[1]

步骤1：2-((5-溴-3-硝基吡啶-2-基)氧基)乙酸甲酯

将5-溴-2-氯-3-硝基吡啶(5g，21mmol，1.0当量)和2-羟基乙酸甲酯(3.78g，42mmol，2.0当量)和K2CO3(11.59g，84mmol，4.0当量)在DMF(100mL)中的溶液在80℃下搅拌4h。将反应混合物冷却至室温并且过滤。将滤液在减压下浓缩。将混合物用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(用PE:EA＝10:1洗脱)纯化以给出标题化合物(3.53g，58％)。LC-MS(M+H)+＝290.9。

步骤2：7-溴-1H-吡咯并[2,3-B][1,4]恶嗪-2(3H)-酮

在60℃下向在AcOH(30mL)溶液中的2-((5-溴-3-硝基吡啶-2-基)氧基)乙酸甲酯(3.53g，12.13mmol，1.0当量)溶液中分批添加Zn粉(4.73g，72.78mmol，6.0当量)。然后将反应混合物在100℃下搅拌1h，将冷却的反应混合物过滤并且在减压下除去溶剂。将残余物通过硅胶柱色谱法(用DCM:MeOH＝20:1洗脱)纯化以给出标题化合物(1.6g，58％)。LC-MS(M+H)+＝229.0。

应用^[1]

7-溴-1H-吡咯并[2,3-B][1,4]恶嗪-2(3H)-酮可用于制备化合物7-(5-(3-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪，该化合物是一种HPK1抑制剂。

HPK1调节各种免疫细胞的多样功能，并且已显示其激酶活性在T细胞受体(TCR)[Liou J.,等人,Immunity,2000.12(4):p.399-408]、B细胞受体(BCR)[Liou J.,等人,Immunity,2000.12(4):p.399-408]、转化生长因子受体(TGF-βR)[Wang,W.,等人,J BiolChem,1997.272(36):第22771-5页；Zhou,G.,等人,J Biol Chem,1999.274(19):第13133-8页]、或Gs偶联的PGE2受体(EP2和EP4)[Ikegami,R.,等人,J Immunol,2001.166(7):第4689-96页]的激活之后被诱导。HPK1的过表达以激酶依赖性的方式抑制TCR诱导的AP-1依赖性基因转录的激活，表明需要HPK1来抑制Erk MAPK途径[Liou J.,等人,Immunity,2000.12(4):第399-408页]并且这种阻断被认为是负调节TCR诱导的IL-2基因转录的抑制机制[S.Sawasdikosol.,等人,Immunol Res,2012.54:262-265]。

体外HPK1-/-T细胞具有较低的TCR激活阈值，稳健地增殖、产生增强量的Th1细胞因子，HPK1-/-小鼠经历更严重的自身免疫症状[S.Sawasdikosol.,等人,Immunol Res,2012.54:262-265]。在人体中，HPK1在银屑病性关节炎患者的外周血单核细胞或系统性红斑狼疮(SLE)患者的T细胞中下调[Batliwalla F.M.,等人,Mol Med,2005.11(1-12):第21-9页]，这表明HPK1活性的减弱可能有助于患者的自身免疫。此外，HPK1还可以经由T细胞依赖性机制控制抗肿瘤免疫。在产生PGE2的Lewis肺癌肿瘤模型中，与野生型小鼠相比，肿瘤在HPK1敲除小鼠中发展得更慢[美国专利申请号2007/0087988]。HPK1缺陷型T细胞在控制肿瘤生长和转移方面比野生型T细胞更有效[Alzabin,S.,等人,Cancer ImmunolImmunother,2010.59(3):第419-29页]。类似地，与野生型BMDC相比，来自HPK1敲除小鼠的BMDC更有效地产生T细胞应答以根除Lewis肺癌[Alzabin,S.,等人,J Immunol,2009.182(10):第6187-94页]。总之，HPK1可能是用于增强抗肿瘤免疫的良好靶标。

参考文献

[1] [中国发明] CN201980038718.0 作为HPK1抑制剂的吡咯并[2,3-B]吡啶或吡咯并[2,3-B]吡嗪及其用途