SD208 (TGF-βSmad抑制剂)

背景^[1]

SD208又称2-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-1H-吡唑-4-基]-1,5-萘啶，是一种有毒物质。分子式:C17H10N6FCl分子量:352.7529。SD-208抑制TGF-β–敏感性CCL64细胞的生长抑制,EC50值为0.1μmol/L。细胞因子转化生长因子(TGF)-β成为实验治疗人脑恶性胶质瘤的的主要靶点。SD-208作为一种新型转化生长因子β受体I激酶的抑制剂,抑制生长和侵袭,且增强体内外小鼠和人脑胶质瘤细胞的免疫原性。

体外实验:SD-208抑制由重组TGF-β1或TGF-β2,或含TGF-β的胶质瘤细胞上清液介导的TGF-β–敏感性CCL64细胞的生长抑制,EC50值为0.1μmol/L.SD-208也阻断胶质瘤细胞中的自分泌和旁分泌TGF-β信号,而其是通过Smad2或TGF-β的磷酸化报告实验中检测出来的,且SD-208强效抑制组成型和TGF-β诱发的迁移和侵袭,但是不抑制其活力或增殖。

另外,在重组TGF-β或含TGF-β的胶质瘤细胞上清液存在时,SD-208可恢复多克隆自然杀伤细胞对胶质瘤细胞的溶解活性.体内实验:在脾脏和大脑中,通过证明对TGF-β诱发的Smad磷酸化的抑制作用来验证SD-208的口服生物利用度.在同系VM/Dk小鼠脑中植入SMA-560细胞后3天开始全身SD-208用药,可将中位生存期从18.6延长至25.1天.组织学分析表明,血管形成\增殖或细胞凋亡方面没有区别。

然而,动物SD-208用药后可增加自然杀伤细胞\CD8 T细胞及巨噬细胞肿瘤浸润.这些数据证实,TGF-β受体I激酶抑制剂(例如SD-208)是一种有前景的用于治疗人脑恶性胶质瘤和其他与病理TGF-β活性相关病症的新药剂。

应用^[2]

SD208 (TGF-βSmad抑制剂)可用于研究TGF-β信号通路负反馈调节对于机体的影响。SD208是TGF-β受体抑制剂,可以特异性抑制TGF-β信号通路。用TGF-β与SD208分别和共同处理人骨肉瘤细胞HOS、MG-63,采用划痕实验检测TGF-β对细胞迁移的影响,侵袭实验(Transwell)检测TGF-β对细胞侵袭的影响,实时荧光定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)检测TGF-β与SD208处理细胞后PTHr P(甲状旁腺激素相关蛋白)、解离素19(ADAM19)、白细胞介素-11(IL-11)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因的变化,蛋白免疫印迹检测TGF-β与SD208对细胞PTHr P和MMP-2蛋白的作用。

TGF-β和SD208处理细胞后各基因、蛋白及侵袭和迁移能力的变化,通过Graphpad Prism 5统计学软件进行统计分析,采用单因素方差分析经行分析,两两比较采用Bonferroni法进行比较。

结果 TGF-β刺激骨肉瘤细胞后,细胞侵袭及迁移能力增强,HOS对照组、TGF-β组、SD208组和TGF-β+SD208组24 h侵袭细胞数分别为(73.4±5.2)个、(161.8±8.1)个、(55.3±4.5)个、(68.2±6.1)个,差异有统计学意(F=6.9,P<0.05);MG63细胞为(19.9±1.5)个、(32.3±2.2)个、(15.7±1.5)个、(17.6±2.5)个,差异有统计学意义(F=7.3,P<0.05)。TGF-β能够明显上调细胞PTHr P、ADAM19、IL-11、VEGF和MMP-2 mRNA的表达,同时PTHr P与MMP-2的蛋白表达明显升高。

HOS对照组、TGF-β组、SD208组和TGF-β+SD208组PTHr P蛋白表达量分别为(0.2±0.02)、(0.5±0.07)、(0.2±0.02)、(0.2±0.14)差异有统计学意义(F=4.6,P<0.05)。MMP-2蛋白表达量分别为(0.4±0.03)、(0.8±0.02)、(0.2±0.02)、(0.3±0.02)差异有统计学意义(F=5.1,P<0.05)。结论外源性TGF-β能够增强人骨肉瘤细胞HOS、MG-63细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与升高细胞内PTHr P、ADAM19、IL-11、VEGF和MMP-2有关。SD208可以特异性抑制TGF-β信号通路。

参考文献

1. Leung SY,Niimi A,Noble A,Oates T,Williams AS,Medicherla S,Protter AA,Chung KF.Effect of transforming growth factor-beta receptor I kinase inhibitor 2,4-disubstituted pteridine(SD-208) in chronic allergic airway inflammation and remodeling.J Pharmacol Exp Ther.2006;319(2):586-94.

2.  转化生长因子对两种人骨肉瘤细胞株侵袭和迁移的影响[J]. 樊攀,兰海峰,陈艺,张姝江,白波.中华关节外科杂志(电子版) . 2017(02)