Recombinant Rat Eotaxin-2/CCL24

背景^[1][2][3]

Recombinant Rat Eotaxin-2/CCL24中趋化因子（CC基序）配体24（CCL24），也称为骨髓祖抑制因子2（MPIF-2）或嗜酸性粒细胞趋化蛋白2（eotaxin的-2）是一种蛋白质，在人中由编码CCL24 基因。该基因位于人类7号染色体上。CCL24是属于CC 趋化因子家族的小细胞因子。CCL24与之交互趋化因子受体 CCR3，以诱导趋化性在嗜酸性粒细胞。 这种趋化因子对静息T 淋巴细胞也具有强烈的趋化作用，对中性粒细胞也具有轻微的趋化作用。

阿司匹林加重呼吸系统疾病（AERD）患者（如哮喘）的嗜酸性粒细胞趋化因子-2水平升高。血浆eotaxin-2水平较低的人尚未表现出发生阿司匹林诱发性哮喘的倾向。趋化因子是一组有趋化功能的可溶性细胞因子,通常由70-90个氨基酸组成。通过与细胞膜上相应的G蛋白耦联受体结合,趋化因子在淋巴细胞的募集和活化等免疫反应过程中发挥着重要作用。

到目前为止,在人体已经发现了大约50种趋化因子以及相应的约18种趋化因子受体。依据其结构中半胱氨酸残基位点的不同,趋化因子被分为CXCL、CCL、C和CX3C四大亚家族。趋化因子CCL24属于嗜酸性粒细胞选择性趋化和激活因子eotaxins类分子,也被称为eotaxin2或MPIF-2(myeloid progenitor inhibitory factor2)。CCL24与唯一受体CCR3结合后,在人体广泛参与过敏性疾病、寄生虫感染、系统性疾病等多种免疫相关疾病的发病过程。

既往研究表明,人早孕期母胎界面存在eotaxins家族的eotaxin1/CCL11分子,并且高表达eotaxins类分子的共同受体CCR3。因此,我们推测：人早孕期母胎界面表达有趋化因子CCL24, CCL24与受体CCR3结合可能参与子宫内膜蜕膜化、胚胎种植以及母胎免疫耐过程的形成,并发挥一定的调节作用。

应用^[4]

趋化因子CCL24/CCR3在人早孕期母—胎界面拥有一定的表达及功能调节作用。免疫组织化学(IHC, Immunohistochemistry)、酶联免疫吸附试验(ELISA, Enzyme-linked immunosorbent assay)及流式细胞术(FCM, flow cytometry)测定滋养细胞分泌或表达CCL24/CCR3的水平。将蜕膜基质细胞(DSCs, decidual stromal cells)与Tros细胞共培养48h,检测Tros分泌CCL24以及表达CCR3水平的变化。

在体外,rhCCL24处理Tros48h后,BrdU增殖实验检测Tros细胞增殖情况,MTT比色法检测Tros细胞活力,侵袭实验了解Tros细胞侵袭力的变化。结果本实验室建立的滋养细胞原代培养方法,可得到CK7+Tros细胞纯度达85%。IHC结果显示,绒毛组织表达中等水平的CCL24,并高表达CCR3受体。ELISA检测Tros细胞体外培养24-96h不同时段的上清,我们发现Tros细胞上清中存在CCL24蛋白,其含量随时间增加而降低。

FCM检测Tros细胞膜上CCR3表达水平为(10.79±0.82)%。等比例DSCs与Tros共培养48h后,CK7+Tros占总细胞数的(21.33±4.21)%。共培养上清中CCL24分泌的水平增加,结果有显著差异。共培养后,Tros细胞表面的CCR3表达水平也明显增加,至(57.15±11.27)%。在体外,rhCCL24促进Tros细胞的增殖和细胞活力,并以1ng/ml效果最明显。另外,rhCCL24呈剂量依赖性抑制Tros的侵袭能力,高浓度时抑制作用最显著。

结论本课题的原代滋养细胞培养方法能得到较高纯度的Tros细胞。人早孕期母胎界面的Tros细胞可分泌趋化因子CCL24,并表达其受体CCR3,提示在母胎界面CCL24/CCR3可能通过自分泌方式调解自身的生物学功能,从而参与胚胎种植和胎盘形成过程。Tros与DSCs共培养,可模拟母胎界面Tros与DSCs直接接触状态。

共培养系统中CCL24的分泌水平增加,DSCs能促进Tros细胞膜上CCR3的表达。CCL24促进Tros细胞增殖和细胞活力,利于胚胎种植和胎盘形成。同时,CCL24又抑制Tros细胞侵袭能力,控制滋养细胞侵入过度引起滋养细胞相关疾病。因此,CCL24在胚胎种植过程中可调控滋养细胞侵入蜕膜的程度,从而发挥双向调节作用。

参考文献

1.  Patel VP, Kreider BL, Li Y, Li H, Leung K, Salcedo T, Nardelli B, Pippalla V, Gentz S, Thotakura R, Parmelee D, Gentz R, Garotta G (April 1997). "Molecular and functional characterization of two novel human C-C chemokines as inhibitors of two distinct classes of myeloid progenitors". J. Exp. Med. 185 (7): 1163-72. doi:10.1084/jem.185.7.1163. PMC 2196270. PMID 9104803.

2. ^ Hillier LW, Fulton RS, Fulton LA, et al. (July 2003). "The DNA sequence of human chromosome 7". Nature. 424 (6945): 157-64. doi:10.1038/nature01782. PMID 12853948.

3. ^ White JR, Imburgia C, Dul E, Appelbaum E, O'Donnell K, O'Shannessy DJ, Brawner M, Fornwald J, Adamou J, Elshourbagy NA, Kaiser K, Foley JJ, Schmidt DB, Johanson K, Macphee C, Moores K, McNulty D, Scott GF, Schleimer RP, Sarau HM (November 1997). "Cloning and functional characterization of a novel human CC chemokine that binds to the CCR3 receptor and activates human eosinophils". J. Leukoc. Biol. 62 (5): 667–75. PMID 9365122.

4. 人早孕蜕膜组织及蜕膜基质细胞趋化因子受体及配体的转录特征[J]. 贺银燕,贺晓菊,李大金,郭培奋,周雯慧.  中华微生物学和免疫学杂志. 2007 (05)