Recombinant Rat IL-33的生物学活性检测

背景^[1]

Recombinant Rat IL-33是IL-1家族的新成员， 可以从内皮静脉细胞中分离获得, 该因子与Th2型反应密切相关。ST2为IL-1受体超家族的成员。Schmitz等发现Recombinant Rat IL-33是ST2的特异性配体。IL-33与ST2结合促使Th2型细胞因子的产生, 从而参与Th2型反应的发生。研究表明, 当小鼠暴露于链格孢菌 (Alternaria alternata) 环境中时, 链格孢菌将诱导Recombinant Rat IL-33快速释放入气道管腔, 出现Th2型反应，具有生物活性的Recombinant Rat IL-33存储于人气道上皮细胞核内。

Recombinant Rat IL-33特性^[1]

在体外, 将这些上皮细胞暴露于链格孢菌, 可促使Recombinant Rat IL-33释放到细胞外, 也诱导危险信号分子ATP在细胞外累积;自分泌的ATP将持续增加细胞内Ca²⁺浓度, 通过激活P2嘌呤受体释放IL-33。在链格孢菌引起的小鼠气道炎症模型中, 嘌呤受体的抑制剂或P2Y2基因缺失将抑制IL-33释放和Th2型反应, 这也突出了ATP和P2Y2受体的重要作用。IL-33/ST2信号传导通路与典型的Th2类细胞因子有所不同。IL-33一般是与胞膜上IL-1RAc P和ST2结合, 然后结合成一个异二聚体, 电信号通过该二聚体传导至细胞内, 同时募集IL-1受体相关激酶 (IL-1 receptorassociated kinase, IRAK) 、肿瘤坏死因子受体相关因子 (tumor necrosis factor receptor-associated factor, TRAF6) 和髓样分化因子 (myeloid differentiation factor 88, My D88) 等下游信号分子, 并激活下游丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinases, MAPKK) , MAPKK则反过来通过cjun N端激酶 (c-Jun N-terminal kinase, JNK) 激活蛋白-1 (activator protein-1, AP-1) 。TRAF6还能激活核因子-kappa B (NF-κB) , 诱导IL-4、IL-5和IL-13等Th2型细胞因子的产生。

Recombinant Rat IL-33的生物学活性检测^[2]

将商业化途径获得的Recombinant Rat IL-33及纯化制备的Trx/IL-33与成熟形式IL-33从50ng/μl开始倍比稀释, 刺激培养的Raw264.7巨噬细胞, 通过ELISA检测培养上清中TNF-α水平。以Recombinant Rat IL-33标准品刺激结果绘图作为代表显示Recombinant Rat IL-33刺激Raw264.7产生TNF-α的剂量效应 (图5) 。结果显示, IL-33标准品、Trx/IL-33融合蛋白、成熟形式IL-33的EC50值分别为3.037 ng/ml、12.97 ng/ml、1.186 ng/ml, 表明纯化的IL-33成熟蛋白具有与商业化重组IL-33相当的细胞生物学活性。

小鼠不同粘膜组织样品中HBc Ag特异的Ig A水平^[2]

采集经滴鼻免疫小鼠的支气管肺泡灌洗液 (BALF) , 血清, 阴道灌洗液, 肠灌洗液样品, 以ELISA检测HBc Ag特异的Ig A水平。结果显示 (图6) , HBc Ag作为模式抗原经鼻免疫小鼠后, 在不同粘膜组织及血清中都诱导产生了特异的Ig A抗体应答。以Recombinant Rat IL-33作为佐剂, 可以增强HBc Ag特异的Ig A的水平, 经Student t检验分析表明在BALF中IL-33显著增加了HBc Ag特异的Ig A水平, 具统计学意义 (P<0.05, n=4/组) 。

参考文献

[1] 白细胞介素-33在过敏性哮喘小鼠体内的变化及作用.柴强,宋红玉,李朝品.

[2]重组小鼠白细胞介素-33的原核表达制备及其粘膜免疫佐剂活性.冯雪军,龙琼,唐增华,黄惟巍.