Recombinant Rat GM-CSF表达载体的构建及应用

背景^[1]

粒细胞巨嚥细胞集落刺激因子（GM-CSF）具有刺激树突状细胞分化成熟、诱导粒细胞和巨噬细胞系增殖分化以及调节免疫应答的作用。在已知细胞因子中，GM－CSF是肿瘤免疫治疗中最重要的因子之一。基于GM－CSF设计的瘤苗已进行了深人的动物实验研究，并开展了多项相关临床实验，展现了较好的应用前景。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (granulocytemacrophage colony-stimulating factor, GM-CSF) 是最有效的、特异的长效抗肿瘤免疫诱导剂。GM-CSF刺激树突状细胞的成熟, 增强抗原递呈细胞的功能并间接影响NK细胞的活性。GM-CSF基因的导入能诱导细胞毒性T淋巴细胞 (cytotoxic T lymphocyte, CTL) 前体细胞的分化和成熟, 并上调NK细胞和IL-2激活的LAK细胞活性, 增强机体的非特异性和特异性抗肿瘤作用。

Recombinant Rat GM-CSF基因的高效真核表达载体^[1]

Recombinant Rat GM-CSF的高效真核表达载体，筛选导人该载体后高水平表达GM-CSF的小鼠淋巴细胞系RMA．并讨转GM-CSF基因瘤苗治疗小鼠T淋巴组胞的方法。

方法: PCR扩增小鼠 GM-CSF CDNA3＇端770bp的片段，将其插人真核表达载体 pcDNA3；用电穿孔法将构建的体导人小鼠淋巴瘤细胞系RMA，有限释法制备单个细胞克魔，经RT-PCR、骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验选相对高表达GM-CSF的RMA克隆，该克隆细胞经丝裂霉素灭活后免疫小鼠以诱导其产生抵抗RMA肿瘤细胞再攻击的能力。

结果；构建的重组质粒含有预期片段，插人方向正确，核酸序列无误；且获得了高表达 GM－CSF的RMA克隆，将其用丝裂霉素灭活免疫小鼠后使它们产生了抗肿瘤免疫保护力。

结论：转 GM－CSF基因瘤苗可能作为有效的抗T淋巴细胞瘤瘤苗。

Recombinant Rat GM-CSF基因治疗能有效提高荷瘤小鼠的免疫功能^[2]

方法:将B16黑色素瘤细胞 (5×106/只) 接种于C57/BL6小鼠右侧背部皮下后, 将荷瘤小鼠随机分为2组, 每组12只, 待瘤体直径达5mm时分别注射AdCMVGMCSF、AdCMVLacZ (5×108PFU/只) , 检测每组小鼠的免疫功能及其对B16黑色素瘤的抑制作用。结果:AdCMVGMCSF实验组小鼠注射后第10天, 荷瘤鼠血清中GMCSF水平[ (1563.72±136.58) ng·L-1]高于对照组 (P<0.01) , 肿瘤组织周围的CD8+T细胞表达明显增强。结论:AdCMVGMCSF可增强荷B16黑色素瘤小鼠的抗肿瘤免疫反应, 具有抑制肿瘤生长的作用。

参考资料

[1]小鼠GM-CSF基因真核表达载体的构建及其表达活性的鉴定.张叔人，周春霞，马文波.中国免疫学杂志.

[2]含鼠GM-CSF基因的腺病毒载体对荷B16黑色素瘤小鼠免疫功能的影响 .王建伟,高航,高嵩,丛建军,陈远耀