酸性黄 23的检测

背景及概述^[1][2]

酸性黄23又名柠檬黄。为我国允许使用的人工合成色素之一，又称肼黄，别名酒石黄，单偶氮色素，为橙黄色粉末，无臭，0.1%水溶液呈黄色，耐热性、耐酸性、耐光性、耐盐性均较好。经过长期、广泛的动物毒性试验证明其安全性很高。ADI值为0～7.5mg/kg体重。单独或与其他色素混合使用时，使用量为0.1g/kg。

食用柠檬黄，食用合成色素三原色之一，也是在世界上被允准用于食品着色最广泛的一个合成色素，约占全球合成色素总量的百分之三十。而在中国的食用合成色素3000吨年需求中，柠檬黄占1200吨，约占百分之四十强。

制备^[2]

一种柠檬黄的制备方法，步骤包括：

(a)2-乙酰基丁二酸二甲基酯与摩尔比为1∶0.90-1.10的对氨基苯磺酸重氮盐在以2-乙酰基丁二酸二甲基酯的物质的量计摩尔比为0.05-0.5的相转移催化剂和以2-乙酰基丁二酸二甲基酯的物质的量计摩尔比为1.5-2.5的缚酸剂存在下进行缩合，得到缩合物，所述相转移催化剂包括聚乙二醇、司班、吐温、平平加0或其组合；

(b)所述缩合物与以缩合物的物质地量计摩尔比为0.90-1.10的对氨基苯磺酸重氮盐偶合并水解，得到柠檬黄。

具体操作举例如下：

500mL四颈瓶中，加入60℃热水180mL，加入20g聚乙二醇400(PEG-400)， 快速搅拌下加入对氨基苯磺酸34.6g(0.20mol)，搅拌十分钟，冷至室温，加入工业盐酸32mL(31％)。继续冷至0-5℃，液下滴加30％亚硝酸钠溶液 47g(0.20mol)，维持温度5-10℃，约20min加毕，刚果红试纸蓝色、碘化钾 淀粉试纸浅蓝色。加毕后继续搅20min，加少量氨磺酸消去过量的亚硝酸。

上述重氮液中，搅拌5min后细流加入DMAS(2-乙酰基丁二酸二甲酯) 37.64g(0.20mol)，控制温度10-15℃，慢慢滴加15wt％磷酸氢二钠溶液调 pH至5.0，体系转成透明的酒红色。待重氮盐消失后，再搅拌半小时，制得缩合液。另行再制备一份重氮盐。消去过量的亚硝酸后加入15％磷酸氢二钠溶液调 pH 1.0-2.0。

前述缩合液转至1000mL四颈瓶中，加20wt％纯碱水溶液调PH8.0-9.0。搅拌下细流加入第二份重氮盐，温度15-20℃，约20min加完，pH6.5-8.0。加完后再搅拌半小时制得偶合液。偶合液中撒入纯碱调pH9.0-9.5，升温至80-90℃，保温一小时。隔套冷却至55℃，加盐酸约20mL调PH6.5-7.5。抽滤，按体积的10％量加入精盐， 搅拌至溶解，继续慢慢冷却至5-10℃。抽滤。滤饼溶于2000mL水中，进实验 室膜分离装置(0.3Mpa、45-50℃)脱盐至料液电导率恒定不下降及料液体积 300mL止，浓缩液于烘箱中80℃烘干得成品108.4g，含量90.1％，液相纯度 99.48％(238nm)，收率91.4％。

检测方法^[3]

一、对柠檬黄的现代分析手段已非常成熟，且灵敏度较高。

常用的检测方法有TLC、HPLC、电化学分析法、新型生物传感器法、紫外分光光度法等，这些检测方法特点显著，各有千秋。但由于某些样品基体成分复杂，含量低，直接测定较为困难。为此在检测前先对样品进行预处理，再用较为简便的方法进行含量测定，可以显著提升样品中柠檬黄色素检测的选择性和灵敏度，提高检测效率。

传统的样品前处理方法主要有SPE、LLE、UAE、MAE等。但这些方法存在着不少缺点，如处理过程存在有毒、有机溶剂，操作过程繁琐，时间成本较高，甚 至会引起分析物质的分解或流失。因此，要达到快速、准确的测定固体菓珍、果冻等基质复杂的食品样品中柠檬黄，对样品的前处理-预富集具有关键性的作用。

CN201810032455.X提供了一种柠檬黄的检测方法，以达到有效从食品中分离检测柠檬黄的目的，本方法检测限低，显著提升样品中柠檬黄色素检测的选择性和 灵敏度，提高检测效率。

技术方案如下：一种柠檬黄的检测方法，采用吸附柱对待测样品进行预富集，加入解吸剂进行洗脱，采用紫外-分光光度法测定洗脱液中柠檬黄的含量，其中，所述吸附柱中的吸附剂为胺化腐植酸-纳米SiO2复合材料。本发明选用对柠檬黄色素吸附效果较好的胺化腐植酸-纳米SiO2复合材料制备吸附柱，再联用紫外-可见分光光度法对食品样品中柠檬黄含量进行检测，用以实现对食品中柠檬黄的有效检测和评价分析。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：(1)本发明的前处理方法操作过程简便，时间短，无毒，分析物质不流失；(2)本发明对柠檬黄色素的检测结果的精密度和准确度较好，检测时间短，能很好地应用于柠檬黄色素的快速检测，具有较大的经济价值与优势；(3)本发明使用的HA-T-S复合材料具有良好的解吸性能且重复利用率高。

二、CN201410427037.2提供一种检测饮料样品中柠檬黄含量的方法。

CN201410427037.2检测柠檬黄含量的原理：氧化石墨烯对有机化合物是一种非常有效的荧光淬灭剂。以386nm波长激发，靛红缩对苯二胺双席夫碱在483nm处出现了荧光发射峰，当在靛红缩对苯二胺双席夫碱中加入一定量纳米氧化石墨烯悬浮液后发现，其荧光强度直线下降，这是由于氧化石墨烯具有对荧光淬灭效应所致，当向上述溶液加入一定量的柠檬黄后，靛红缩对苯二胺双席夫碱的荧光强度又增强，这是由于柠檬黄与纳米氧化石墨烯（rGO）的吸附作用大于靛红缩对苯二胺双席夫碱与纳米氧化石墨烯（rGO）之间的吸附作用力。

靛红缩对苯二胺双席夫碱被从纳米氧化石墨烯（rGO）表面脱附下来，这也同时说明纳米氧化 石墨烯（rGO）和柠檬黄（Tz）可以作为靛红缩对苯二胺双席夫碱的荧光分子开关组，据此建立了靛红双席夫碱-氧化石墨烯荧光传感器快速检测柠檬黄含量的新方法。

具体步骤为：

（1）准确称取0.0122g靛红缩对苯二胺双席夫碱溶于10mLN,N-二甲基甲酰胺（DMF）溶剂中，用超纯水稀释，配置成122ng/mL的溶液。

（2）准确称取0.0532g纳米氧化石墨烯（rGO）溶于5mL超纯水后定容于10mL容量瓶中，获得浓度为5.32mg/mL的纳米氧化石墨烯储备悬浮液，置于阴凉处保存待用，用时稀释成不同浓度的溶液。

（3）将步骤（2）所得的浓度为5.32mg/mL的纳米氧化石墨烯储备悬浮液稀释配制成 浓度为2.66μg/mL的纳米氧化石墨烯悬浮液。

（4）在一个10mL具塞试管中加入2mL步骤（1）所得溶液和2mL步骤（3）所得浓度为 2.66μg/mL的纳米氧化石墨烯悬浮液，充分摇匀，得到混合溶液。

（5）在步骤（4）所得混合溶液中，分别加入2mL 浓度为8.58ng/L～327ng/L的柠檬黄溶液，混合均匀后，各取适量该溶液于10mm比色皿中，在室温条件下，控制狭缝宽度均为5.0，激发波长和发射波长λex/λem=386nm/483nm，分别测定其荧光强度（F），结果表明柠檬 黄浓度在8.58ng/L～327ng/L范围内时，荧光强度（F）与柠檬黄溶液的浓度具有良好的线性关系，计算得到的其线性回归方程为F = 0.4454CTz－2.9562，R=0.991，检出限为0.34ng/L。

（6）加热煮沸除去饮料中的CO₂，准确量取该饮料5.00mL，用超纯水定容至50mL，再将该溶液加入到步骤（4）所得混合溶液中，取适量该混合溶液于10mm比色皿中，在室温条件 下，控制狭缝宽度均为5.0，激发波长和发射波长λex/λem=386nm/483nm，测定其荧光强度 （F），代入步骤（5）中的线性回归方程，计算饮料样品中柠檬黄的浓度和柠檬黄的含量。

主要参考资料

[1] 卫生学大辞典

[2] CN200510030644.6 柠檬黄的制备方法

[3] CN201810032455.X 一种柠檬黄的检测方法

[4] CN201410427037.2 一种检测饮料样品中柠檬黄含量的方法