植物组织总RNA提取试剂盒的应用

背景^[1-3]

植物组织总RNA提取试剂盒可以从植物组织，特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织（如成熟水稻叶片，棉花叶片，拟南芥种子，香蕉，马铃薯块茎，苹果，西瓜果肉，猕猴桃，梨，月季，烟草，沙棘，百合等）中快速提取总RNA，提取的RNA可用于可用于RT-PCR、qPCR、普通转录组测序、全长转录组测序等多种下游实验。

试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,可从植物组织中快速提取总RNA,可同时处理大量不同样品。30-40分钟内即可完成反应,操作简单,提取迅速,溶液毒性小,实验安全。提取的总RNA纯度极高,没有蛋白和其他杂质的污染。

植物组织总RNA提取试剂盒

产品特点:

针对植物材料独特配置,操作更简单、流程更优化。

配有高效的DNaseⅠ,可有效去除DNA污染。

配有CS过滤柱,可有效去除其它杂质。

RNA纯度更高,无杂质残留,特别适合于对纯度要求很高的下游实验。

操作安全可靠,无需酚/氯仿抽提,无需氯化铯梯度离心,无需氯化锂或乙醇沉淀。

操作流程：

1、100-200mg种子组织粉末中加入300μL预处理液，充分震荡混匀。（请勿使用超过200 mg的组织，过量将会导致杂质去除不尽）

2、加入300μL酚仿溶液（苯酚：氯仿=1：1），再次充分震荡混匀。

3、4℃下13,000rpm离心10分钟，将上清转移至新的离心管中。

4、加入1mL的RNA提取液，混匀后室温放置5分钟，然后加入200μL氯仿，再次震荡混匀。

5、4℃下13000rpm离心10分钟，将上清转移至新的离心管中。

6、加入2/3上清体积的异丙醇，混匀后室温下放置5分钟充分沉降RNA。

7、4℃下13000rpm离心10分钟，弃上清。

8、加500μL 75%酒精，13000rpm离心5分钟，弃液体。超净台中吹干后加入50μL DEPC.H2O溶解即可。（注意不要过度干燥RNA沉淀，会导致RNA极度难溶）

应用^[4][5]

用于南瓜属植物总RNA的提取及抗氧化酶基因的扩增研究

RNA提取是研究基因分离和表达的步，从含有多酚、多糖以及次生代谢物质的植物组织中提取RNA存在很多问题，会造成RNA在提取过程中氧化、褐化、降解。为了建立一种经济快速的从南瓜属植物中提取RNA的方法，尝试了CTAB法、一步法、尿素/氯化锂法、热酚法、LUG法5种方法，对结果进行比较和改进之后确定了一种适合南瓜和西葫芦组织的RNA提取方法即改良CTAB法。

该方法全程只需要2h，通过用等体积的异丙醇在-20℃处理20min来沉淀RNA，用高浓度的NaCl（1.0-2.5M）和醋酸钠来有效的去除多糖类化合物，利用该方法从西葫芦和南瓜叶子以及果肉中成功的提取了总RNA。提出来的RNA很清楚的显示出28s和18s两条链，RNA的产量是210-250μg/g鲜重，A260/280是2.08-2.15，A260/230是2.0-2.12，提出来的RNA是没有多酚、多糖、蛋白质污染的高纯度的RNA。

同时验证了RNA的保存方法，将RNA沉淀浸入无水乙醇中然后放在-80℃冰箱中保存，静置6个月后RNA质量无变化。建立了一种简并引物设计的方法：在NCBI中搜索出同一个属中15种植物中同一种蛋白质的序列，然后在NCBI中找出对应的cDNA序列，利用CLCMain Workbench6，通过sequence alignment，结合引物设计的原则，设计出了南瓜和西葫芦组织中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶基因的简并引物。

将南瓜和西葫芦叶子和果肉中的Cu/Zn-SOD、Mn-SOD片段基因扩增了出来以及叶子中的过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶片段基因也扩增出来。获得了南瓜和西葫芦的叶子以及果肉中Cu/Zn-SOD的cDNA序列，并将西葫芦果肉中的Cu/Zn-SOD片段基因投递到NCBI，获取登录号为KF192818。同时验证了同一基因在植物体的不同部位会出现差异性表达。

参考文献

[1]High quality RNA isolation from ployphenol-,polysaccharide-and protein-rich tissues of lentil（Lens culinaris）[J].Prasanta K.Dash.3 Biotech.2013(2)

[2]Two-step purification of Cu,Zn-superoxide dismutase from pumpkin（Cucurbita moschata）pulp[J].Xiaorong Qin,Mingjin Zhang,Jian Qin,Shiwei Yuan,Yali Hou,Jianzhong Liu.Separation and Purification Technology.2011

[3]Cysteine/cystine redox signaling in cardiovascular disease[J].Young-Mi Go,Dean P.Jones.Free Radical Biology and Medicine.2010(4)

[4]NADPH Oxidases:Functions and Pathologies in the Vasculature[J].Bernard Lassègue,Kathy K.Griendling.Arteriosclerosis,Thrombosis,and Vascular Biology.2010(4)

[5]周腾飞.南瓜属植物总RNA的提取及抗氧化酶基因的扩增[D].武汉科技大学,2013.