人内脂素(VF)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人内脂素(VF)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人内脂素（Visfatin）的含量。

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人内脂素（Visfatin）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人内脂素（Visfatin）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人内脂素(VF)ELISA试剂盒

样本处理及要求

1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

[实验结果计算]

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于系统性红斑狼疮患者血清内脂素水平与胰岛素抵抗的相关性研究

通过检测系统性红斑狼疮（SLE）患者血清内脂素水平,并与相关指标进行统计学分析,探讨SLE患者中血清内脂素的水平与胰岛素抵抗（IR）的相关性。

方法:以65例和健康体检者24例为研究对象。将SLE患者分组:依据中国肥胖协作组的肥胖标准将其分为体重指数（BMI）≥28kg/m2的肥胖组9例和BMI<28kg/m2的非肥胖组56例;以胰岛素抵抗指数（HOMA–IR）=2.2为切点,将其分为HOMA–IR≥2.2的胰岛素抵抗（IR）组34例和HOMA–IR<2.2的非IR组31例;根据系统性红斑狼疮疾病活动度（SLEDAI）评分分为SLEDAI≥10分的活动组39例和SLEDAI<10分的缓解组26例;根据既往是否接受过糖皮质激素和（或）免疫抑制剂治疗将其分为未治疗组33例和治疗组32例,根据近3个月糖皮质激素使用剂量将治疗组分为泼尼松≤7.5mg/d组14例和泼尼松>7.5mg/d组18例。

采用独立样本t检验和单因素方差分析分别比较各组间血清内脂素水平的差异,采用Person直线相关分析和多元线性回归分析探讨SLE患者血清内脂素水平的相关影响因素。

结果:1.SLE组较对照组甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白（LDL）升高、高密度脂蛋白（HDL）降低,差异有统计学意义,提示SLE患者存在脂代谢紊乱。SLE组较对照组空腹血糖（FG）、空腹胰岛素（FINS）和胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）升高、胰岛素敏感指数（ISI）降低,提示SLE患者存在胰岛素抵抗。

2. SLE患者血清内脂素水平较对照组升高,并且差异有统计学意义。分组比较SLE患者的血清内脂素水平,肥胖组高于非肥胖组,IR组高于非IR组,差异有统计学意义;活动组和缓解组的组间血清内脂素水平差异无统计学意义,未治疗组、泼尼松≤7.5mg/d组和泼尼松>7.5mg/d组三组间以及两组间的血清内脂素水平差异无统计学意义。

3.直线相关分析提示,SLE患者血清内脂素水平（ln）与BMI、WHR、FG和HOMA-IR（ln）呈正相关,与年龄、病程、SLEDAI等未见直线相关关系。多元线性回归分析提示,BMI和HOMA-IR（ln）是SLE患者血清内脂素水平（ln）的独立影响因素。

参考文献

[1]Obesity in autoimmune diseases:Not a passive bystander[J].Mathilde Versini,Pierre-Yves Jeandel,Eric Rosenthal,Yehuda Shoenfeld.Autoimmunity Reviews.2014(9)

[2]Visfatin is involved in TNFα-mediated insulin resistance via an NAD+/Sirt1/PTP1B pathway in 3T3-L1 adipocytes[J].Erwan Gouranton,Béatrice Romier,Julie Marcotorchino,Franck Tourniaire,Julien Astier,Franck Peiretti,Jean-Fran?ois Landrier.Adipocyte.2014(3)

[3]Serum adipokine levels in rheumatoid arthritis patients and their contributionsto the resistance to treatment[J].Kyoung Kim,Hyun-Mi Choi,Hye-In Ji,Ran Song,Hyung?In Yang,Soo-Kon Lee,Myung Yoo,Yong-Beom Park.Molecular Medicine Reports.2014(1)

[4]Infliximab,an anti-TNF-alpha agent,improves left atrial abnormalities in patients with rheumatoid arthritis:preliminary results:cardiovascular topic[J].Suha,Cetin,Gokhan,Vural Mustafa,Goksal,Keskin,Ekrem,Yeter,Mehmet,Dogan,Akif,Ozturk Mehmet.Cardiovascular Journal of Africa.2014(4)

[5]李晓洁.系统性红斑狼疮患者血清内脂素水平与胰岛素抵抗的相关性研究[D].天津医科大学,2015.