鼠抗组蛋白3(赖氨酸79位二甲基化)单克隆抗体的应用

背景^[1-3]

鼠抗组蛋白3(赖氨酸79位二甲基化)单克隆抗体是一类可以特异性结合鼠抗组蛋白3(赖氨酸79位二甲基化)的单一抗体，主要用于体外特异性检测组蛋白3(赖氨酸79位二甲基化)的免疫学实验。

组蛋白（histone）是真核生物体细胞染色质与原核细胞中的碱性蛋白质，和DNA共同组成核小体结构。它们是染色质的主要蛋白质组分，作为DNA缠绕的线轴，并在基因调控中发挥作用，但是原核细胞组蛋白对基因调控的作用非常微弱。没有组蛋白，染色体中未缠绕的DNA将非常长（人类DNA中的长宽比超过1000万比1）。例如，每个人类二倍体细胞（含有23对染色体）具有约1.8米长的DNA，但是在组织蛋白上缠绕它具有约90微米（0.09毫米）的染色质，当在有丝分裂期间复制和浓缩时，其导致约120微米的染色体。

鼠抗组蛋白3(赖氨酸79位二甲基化)单克隆抗体免疫组化

组蛋白含有H1，H2A，H2B，H3，H4等5种成分。除H1外，其他4种组蛋白均分别以二聚体(共八聚体）相结合，形成核小体核心。DNA便缠绕在核小体的核心上。而H1则与核小体间的DNA结合。因此，一般认为组蛋白作为结构支持体的作用比其基因调节作用更为重要。鸟类、两栖类等含有细胞核的红细胞中，含有一种叫H5的特殊组蛋白。此外，在停止增殖的细胞中，还含有一种叫H1°的组蛋白，H1°的结构与H5相类似。组蛋白可受到甲基化、乙酰化、磷酸化、聚ADP核糖酰化，以及与泛醌(ubiquinone）相结合等几种类型的修饰。组蛋白的修饰与染色质结构的变化及基因活性控制的相关性等。

应用^[4][5]

用于组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合唑来膦酸对多发性骨髓瘤荷瘤小鼠抗肿瘤作用及机制的研究

探讨了组蛋白去乙酰化酶抑制剂与唑来膦酸以不同方式联合应用对多发性骨髓瘤荷瘤鼠的作用，并通过细胞凋亡检测及血清β2微球蛋白（β2-MG）水平的定量以评价对多发性骨髓瘤的疗效，以期为临床治疗提供更多的手段及方法。

方法：1细胞培养和传代人多发性骨髓瘤细胞株KM3细胞，用含10%灭活胎牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素的RPMI1640培养液，置于37℃，50mL/L CO2的培养箱中培养。2～3d传代1次，实验采用对数生长期细胞，台盼蓝染色拒染率95%以上。

2建立KM3荷瘤裸鼠模型将处于对数生长期的KM3细胞用无血清的RPMI1640培养基洗涤2次后，重悬于1:1混匀无血清的RPMI1640培养基中，调整细胞密度为1×108/ml，每只裸鼠右前肢外侧皮下接种0.2ml（细胞数2×107/只），共接种26只。

3观察裸鼠成瘤率各组裸鼠以接种瘤细胞后15天为限，裸鼠右前肢外侧可见可测量肿块为标准，成瘤率=成瘤只数/总只数×100％。

4实验动物分组成瘤裸鼠16只，随机分为4组（每组4只）：a.空白组；b.唑来膦酸组；c.LBH-589组；d.唑来膦酸与LBH-589联合用药组。各组以接种瘤细胞后第16天开始，a组不予用药，b组及c组每只裸鼠分别皮下注射浓度为0.1μmol/L的唑来膦酸及浓度为5nmol/L的LBH-589各0.2ml，d组每只裸鼠先后皮下注射浓度为0.1μmol/L的唑来膦酸及浓度为5nmol/L的LBH-589各0.2ml；每隔2d注射一次，共注射5次（上述各组剂量参照我科前期体外实验确定）。

5抗肿瘤效果观察5.1观察荷瘤小鼠的一般情况及肿瘤的形态、体积变化：5.1.1观察荷瘤小鼠的一般情况：包括精神状况、皮肤光泽、活动度、饮食、饮水情况及体重变化。5.1.2药物5次注射完毕4周后断颈处死荷瘤小鼠，剥离肿块，测量肿块的长径及短径，并根据公式计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率（IR）：V=（长径×短径2）/2；IR=（V0-Vn）/V0×l00％（V0代表空白组的肿瘤体积，Vn为治疗组的肿瘤体积）；各组裸鼠肿瘤体积均取其平均值。

5.2细胞凋亡检测将剥离的实体瘤组织解聚、分散，制备成组织匀浆，用流式细胞仪检测唑来膦酸单药组、LBH-589单药组及两药联合用药组的KM3细胞凋亡率。5.3应用放射免疫法（RIA）测定β2-MG水平。

结果：1人KM3细胞裸鼠皮下移植瘤的成瘤：接种后4天于接种处，即右前肢外侧可见微小突起，约7-9天后可见注射部位出现可测量肿块，随时间推移肿物不断增大，接种成瘤率65.38％（17/26）。成瘤15天后移植瘤短径基本都在5mm以上，取其中肿物形态、大小相近的16只裸鼠用于实验分组。

2实验动物的一般状况：a组裸鼠在实验后期日渐衰竭，精神萎靡，皮肤暗淡，饮食及饮水量较前明显减少，体重明显减轻。b组与c组裸鼠精神尚可，活动度略差，饮食、饮水量轻度减少。d组裸鼠精神状况、活动度、皮肤、饮食饮水量及体重均未见明显异常变化。

3各实验组荷瘤小鼠的肿瘤形态及体积变化：a组随时间延长，肿瘤体积明显逐渐增大。b组及c组肿瘤体积稍有增大。d组随时间延长肿瘤体积未见明显增大，甚至稍有缩小。

参考文献

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[2]Zoledronate Is a Potent Inhibitor of Myeloma Cell Growth and Secretion of IL‐6 and MMP‐1 by the Tumoral Environment[J].SophieDerenne,MartineAmiot,SophieBarillé,MadeleineCollette,NellyRobillard,PatriceBerthaud,Jean‐LUCHarousseau,RégisBataille.J Bone Miner Res.2009(12)

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[4]MS-275,a novel histone deacetylase inhibitor with selectivity against HDAC1,induces degradation of FLT3 via inhibition of chaperone function of heat shock protein 90 in AML cells[J].Chie Nishioka,Takayuki Ikezoe,Jing Yang,Seisho Takeuchi,H.Phillip Koeffler,Akihito Yokoyama.Leukemia Research.2008(9)

[5]谢杨.组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合唑来膦酸对多发性骨髓瘤荷瘤小鼠抗肿瘤作用及机制的研究[D].河北医科大学,2013.