活性炭处理胎牛血清的应用

背景^[1-3]

活性炭处理胎牛血清主要用于受体研究和雌激素相关的细胞研究实验。同时活性炭处理胎牛血清极大的降低了多种激素和生长因子，减少了影响细胞生化分析的干扰因子。性炭处理胎牛血清减少了血清中的类固醇类化合物，3 x 100 nm无菌过滤内毒素≤10 EU/mL，血红素≤20 mg/dL。

胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

活性炭处理胎牛血清

血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

牛血清是细胞培养中用量的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。

1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5.起酸碱度缓冲液作用。

6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

应用^[4][5]

用于下调PTTG1表达对去雄培养前列腺癌LNCaP-AI细胞生长、衰老调节机制影响的初步研究

探讨下调垂体肿瘤转化基因PTTG1的表达对人去势抵抗前列腺癌LNCaP-AI细胞衰老机制的影响。

方法：采用体外诱导的人去势抵抗前列腺癌LNCaP-AI细胞模型,LNCaP-AI细胞转染靶向PTTG1基因的siRNA,制备下调垂体肿瘤转化基因PTTG1表达的LNCaP-AI细胞,观察并记录LNCaP-AI细胞转染成功后细胞数量曲线及细胞形态变化;采用细胞衰老-β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测下调PTTG1的稳定表达对LNCaP-AI衰老细胞数目的影响;免疫印迹法（Western blot）检测转染后LNCaP-AI细胞中细胞衰老相关蛋白Glb1、细胞周期相关蛋白（p21、p27Kip1）、异染色质调节蛋白1γ（HP1γ）、MAPK信号通路蛋白p-ERK和PI3K信号通路蛋白p-Ark、雄激素受体AR蛋白等细胞衰老相关因子的表达情况。

结果（1）在转染过程中,转染组较对照组及阴性对照组,细胞生长曲线呈明显下降趋势（P<0.05）;

（2）免疫印迹法（Western blot）检测转染组PTTG1表达较对照组及阴性对照组明显减低（P<0.05）;

（3）细胞衰老-β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测转染组较对照组中,衰老细胞数目显著增多（P<0.05）;

（4）转染组在10%活性炭/葡聚糖处理的胎牛血清不含酚红RPMI1640培养液中细胞数量未见明显增多,在含10%胎牛血清的培养液中生长细胞数量及对照组在上述不同培养基中细胞数量均呈对数生长（P<0.05）;

（5）Western blot检测转染后LNCaP-AI细胞中细胞衰老相关蛋白Glb1、细胞周期相关蛋白（p21、p27Kip1）、异染色质调节蛋白1γ（HP1γ）较对照组表达明显升高（P<0.05）;雄激素受体AR蛋白、MAPK信号通路蛋白p-ERK和PI3K信号通路蛋白p-Ark等较对照组表达明显下降（P<0.05）。

结论（1）下调PTTG1基因表达促进人去势抵抗前列腺癌细胞株LNCaP-AI细胞衰老;

（2）PTTG1可能通过细胞衰老和雄激素受体途径调控去势抵抗前列腺癌的进展。

参考文献

[1]Cancer statistics in China,2015[J].Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Peter D.Baade,Siwei Zhang,Hongmei Zeng,Freddie Bray,Ahmedin Jemal,Xue Qin Yu,Jie He.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2016(2)

[2]Plasma AR and abiraterone-resistant prostate cancer[J].Romanel Alessandro,Tandefelt Delila Gasi,Conteduca Vincenza,Jayaram Anuradha,Casiraghi Nicola,Wetterskog Daniel,Salvi Samanta,Amadori Dino,Zafeiriou Zafeiris,Rescigno Pasquale,Bianchini Diletta,Gurioli Giorgia,Casadio Valentina,Carreira Suzanne,Goodall Jane,Wingate Anna,Ferraldeschi Roberta,Tunariu Nina,Flohr Penny,De Giorgi Ugo,de Bono Johann S.,Demichelis Francesca,Attard Gerhardt.Science Translational Medicine.2015(312)

[3]Re:AR-V7 and Resistance to Enzalutamide and Abiraterone in Prostate Cancer[J].Samir S.Taneja.The Journal of Urology.2015(2)

[4]PI3K-AKT-mTOR signaling in prostate cancer progression and androgen deprivation therapy resistance[J].Merritt Edlind,Andrew Hsieh.Asian Journal of Andrology.2014(3)

[5]魏洋洋.下调PTTG1表达对去雄培养前列腺癌LNCaP-AI细胞生长、衰老调节机制影响的初步研究[D].蚌埠医学院,2017.