人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒水平。用纯化的人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒，再与HRP标记的血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒浓度。

人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）血浆水平及其基因多态性与冠心病的相关性研究

探讨PDGF-BB血浆水平及其基因多态性与冠心病、冠心病不同临床分型及冠脉病变严重程度的相关性。

方法1、连续入选患者262例。（1）根据冠状动脉造影检查结果,分为冠心病组176例及正常对照组86例;（2）根据患者病史、症状、实验室检查将冠心病组分为SAP组57例,ACS组119例;（3）根据冠脉造影结果按照病变支数将ACS组分为单支病变组38例,双支病变组35例,多支病变组46例。2、记录所有研究对象的一般临床资料,包括性别、年龄、身高、体重、吸烟史、高血压病史、糖尿病史、冠心病家族史。对所有研究对象空腹12小时采取肘部静脉血,用于血脂（TC、TG、LDL-c、HDL-c）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、空腹血糖（FPG）、白细胞（WBC）、血小板（PLT）的测定。酶联免疫吸附法（ELISA）测定PDGF-BB血浆水平。

天根公司生产的人血细胞DNA提取试剂盒提取人基因组DNA,采用Real-Time Taqman PCR方法检测rs1800817位点、rs2285094位点的基因型。3、比较对照组与冠心病组,对照组与SAP组、ACS组,对照组与ACS患者冠脉不同病变支数间的一般临床资料、实验室检查的差异;分别进行以上分组的血浆PDGF-BB水平的比较;分析rs1800817位点、rs2285094位点基因型及等位基因频率在对照组、冠心病组、冠心病不同临床分型组及ACS患者不同病变支数组分布情况的差异;比较不同基因型与PDGF-BB血浆水平的关系,以及不同基因型与冠心病、冠心病不同临床分型及冠脉病变严重程度的关系。

结果1、一般临床资料及实验室检查:冠心病组与对照组比较,年龄、性别、高血压病史、冠心病家族史、糖尿病史、吸烟史、BMI、FPG、TC、TG、LDL-c、HDL-c、hs-CRP、WBC、PLT差异均无统计学意义（P>0.05）。ACS组hs-CRP水平明显高于对照组、SAP组,差异有统计学意义（P<0.05）,SAP组hs-CRP水平与对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。对照组及ACS冠脉不同病变支数组间比较,多支病变组高血压所占比例高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。

2、PDGF-BB血浆水平比较:冠心病组高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;ACS组高于对照组、SAP组,差异有统计学意义（P<0.05）,SAP组与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）;ACS患者中单支病变组、双支病变组及多支病变组与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）,但是三组间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。

3、SNP基因多态性分析对照组与冠心病组、冠脉不同临床分型组及ACS冠脉不同病变支数组比较,rs1800817位点、rs2285094位点基因型分布及等位基因频率差异均无统计学意义（P>0.05）。不同基因型携带者PDGF-BB血浆水平比较,AA与AC+CC比较,TT与TC+CC比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。rs1800817位点AA基因型冠心病组高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;rs2285094位点TT基因型冠心病组高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。4、相关性分析显示PDGF-BB血浆水平与Gensini评分无关;行二分类变量Logistic回归分析,结果显示:高PDGF-BB血浆水平是冠心病发病的危险因素,高HDL-c水平是冠心病发病的保护因素。

参考文献

[1]Alkaloid rich fraction from Nelumbo nucifera targets VSMC proliferation and migration to suppress restenosis in balloon-injured rat carotid artery[J].Moon Young Jun,Rajendra Karki,Keshav Raj Paudel,Bhesh Raj Sharma,Deepak Adhikari,Dong-Wook Kim.Atherosclerosis.2016

[2]Gentiana lutea exerts anti-atherosclerotic effects by preventing endothelial inflammation and smooth muscle cell migration[J].R.Kesavan,S.Chandel,S.Upadhyay,R.Bendre,R.Ganugula,U.R.Potunuru,H.Giri,G.Sahu,U.P.Kumar,B.Reddy,G.Joksic,A.K.Bera,M.Dixit.Nutrition,Metabolism and Cardiovascular Diseases.2015

[3]Angiotensin-（1–7）counteracts the effects of Ang II on vascular smooth muscle cells,vascular remodeling and hemorrhagic stroke:Role of the NFкB inflammatory pathway[J].Ji C.Bihl,Cheng Zhang,Yuhui Zhao,Xiang Xiao,Xiaotang Ma,Yusen Chen,Shuzhen Chen,Bin Zhao,Yanfang Chen.Vascular Pharmacology.2015

[4]IL-1βenhances vascular smooth muscle cell proliferation and migration via P2Y 2 receptor-mediated RAGE expression and HMGB1 release[J].So Young Eun,Young Shin Ko,Sang Won Park,Ki Churl Chang,Hye Jung Kim.Vascular Pharmacology.2015

[5]李繁.血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）血浆水平及其基因多态性与冠心病的相关性研究[D].天津医科大学,2017.