大鼠血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA试剂盒用于检测样本中血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)的含量。

实验原理;将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入微生物化的目标抗体，将未结合的生物素抗体洗净后，加入HRP标记和亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在1333nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

标本的采集与保存：

1、血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4oC过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即

可，或将上清置于-20oC或-80oC保存，但应避免反复冻融。

2、血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8oC 1000×g离心15分钟，

取上清即可检测，或将上清置于-20oC或-80oC保存，但应避免反复冻融。

大鼠血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA试剂盒

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于低分子肝素对COPD大鼠肝细胞生长因子、血管内皮生长因子及白介素-6的影响研究

观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型血浆中的白细胞介素（IL）-6及肺组织中肝细胞生长因子（HGF）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达及低分子肝素（LMWH）干预对它们的影响。

方法将SPF级健康雄性Wistar大鼠30只随机分为三组：①COPD模型组（n=10）：采用熏烟并多次气管内注入脂多糖的方法建立动物模型,于熏烟前半小时在其皮下注射（IH）生理盐水（约1mL,与LMWH等量）；②LMWH干预组（n=10）：制备COPD模型的同时熏烟前半小时给予LMWH（150U/kg,IH）；③空白对照组（n=10）：不做任何干预,正常环境下饲养。观察各组大鼠肺组织的病理改变等结果,分别用ELISA方法检测血浆中IL-6及免疫组化检测大鼠肺组织中HGF、VEGF的表达。分别对HGF、VEGF及IL-6与BALF中的中性粒细胞进行相关性分析。

结果建立的COPD大鼠模型的病理学改变与人类肺气肿的病理改变特点基本一致,干预组大鼠肺组织改变较轻,三组大鼠的肺组织病理形态定量分析有明显差异（P<0.05）；血气分析结果示COPD组与LMWH干预组与对照组相比,Pa02下降,PaC02升高,差异均有统计学意义（P<0.01）,但LMWH组Pa02与PaC02水平介于正常组和模型组之间,差异具有显著性（P<0.05）；BALF中细胞总数及中性粒细胞比例在LMWH干预组及COPD模型组较正常组升高,巨噬细胞比例降低（P<0.01）,LMWH干预组BALF中细胞总数及中性粒细胞比例较COPD模型组减少,巨噬细胞比例增高,差异均有统计学意义（P<0.05）；HGF、VEGF及IL-6水平在COPD组及LMWH干预组均明显高于对照组（P<0.01）,而LMWH组三项指标介于模型组与正常组之间（P<0.05）；相关性分析显示,HGF、VEGF及IL-6的表达与BALF中的中性粒细胞比例呈明显正相关（相关系数r分别为0.725、0.829及0.891,P<0.01）。结论HGF、VEGF及IL-6均参与COPD的气道炎症,LMWH可能通过干预三者的表达来减轻气道炎症。

参考文献

[1]The Effect of Heparin on Antigen-Induced Mucus Hypersecretion in the Nasal Epithelium of Sensitized Rats[J].Takao Ogawa,Shino Shimizu,Takeshi Shimizu.Allergology International.2013(1)

[2]Moving towards a new generation of animal models for asthma and COPD with improved clinical relevance[J].Christopher S.Stevenson,Mark A.Birrell.Pharmacology and Therapeutics.2010(2)

[3]Inflammaging and anti-inflammaging:A systemic perspective on aging and longevity emerged from studies in humans[J].Claudio Franceschi,Miriam Capri,Daniela Monti,Sergio Giunta,Fabiola Olivieri,Federica Sevini,Maria Panagiota Panourgia,Laura Invidia,Laura Celani,Maria Scurti,Elisa Cevenini,Gastone C.Castellani,Stefano Salvioli.Mechanisms of Ageing and Development.2006(1)

[4]Matrix metalloproteinases in asthma and COPD[J].Ingel K Demedts,Guy G Brusselle,Ken R Bracke,Karim Y Vermaelen,Romain A Pauwels.Current Opinion in Pharmacology.2004(3)

[5]郝翠萍.低分子肝素对COPD大鼠肝细胞生长因子、血管内皮生长因子及白介素-6的影响[D].青岛大学,2014.