NVP-TAE684的活性研究

背景及概述^[1]

5-氯-N2-[2-甲氧基-4-[4-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-哌啶基]苯基]-N4-[2-[(1-甲基乙基)磺酰基]苯基]-2,4-嘧啶二胺即NVP-TAE684，是一种选择性有效抑制ALK激酶，作用于其他激酶则没有明显的交叉反应。NVP-TAE684有效抑制Ba/F3 NPM-ALK细胞增殖，IC50为3nM，1μM NVP-TAE684对Ba/F3细胞存活没有效果。NVP-TAE684也抑制表达NPM-ALK人类ALCL细胞系的增殖，包括Karpas-299和SU-DHL-1，IC50为2-5nM。分子模型显示L258可能为NVP-TAE684的主要激酶选择性影响因素之一。用NVP-TAE684处理，快速且持久地抑制NPM-ALK的磷酸化作用。NVP-TAE684作用于表达NPM-ALK的Ba/F3细胞和ALCL病患细胞系，诱导细胞凋亡，且使细胞周期停在G1期。NVP-TAE684作用于H3122 CR细胞，显著克服细胞抗Crizotinib的特性，含有融合致癌基因Eml4-ALK，降低细胞生长，抑制ALK磷酸化作用和诱导细胞凋亡。30nM NVP-TAE684可抑制mALK R1279Q突变表达诱导的神经突增生。

对EML4-ALK阳性肺癌细胞株H2228作用的研究^[1]

广西医科大学苏翠云进行了ALK抑制剂克唑替尼（Crizotinib）及TAE684（NVP-TAE684）对EML4-ALK融合基因阳性人肺癌细胞株H2228增殖和凋亡的影响,为临床用药提供依据。材料和方法：从广东省人民医院肺癌研究所获得EML4-ALK融合基因阳性人非小细胞肺癌细胞株H2228并按常规培养至对数生长期。查阅文献,了解克唑替尼及TAE684在既往实验中的半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration, IC50）值,设置MTT法中药物的浓度梯度,采用MTT法分别分析克唑替尼和TAE684处理72h后H2228细胞的生长增殖情况。采用流式细胞技术分析克唑替尼处理24、48、72h后H2228细胞凋亡的情况。采用SPSS19.0统计软件进行单因素ANOVA分析,计算细胞生长抑制率,p<0.05表示差异有统计学意义；进行回归、Probit分析,选取95%可信区间,计算各药物对H2228细胞株的IC50。结果：克唑替尼使H2228细胞发生早期凋亡,抑制其细胞增殖。在浓度为10nM/L、30nM/L、90nM/L、270nM/L、810nM/L的浓度下,克唑替尼对H2228细胞的抑制率分别为3.39%、10.51%、22.06%、29.60%、80.23%,抑制作用随药物浓度增加而增加（p<0.05）。克唑替尼对H2228细胞的IC50为334.51nM/L。在浓度为335nM/L的克唑替尼作用下,处理24h、48h、72h的H2228细胞早期凋亡率分别为95.3%、90.0%及68.8%,凋亡率随时间的延长而降低（p<0.01）。未经药物处理及经克唑替尼处理24h、48h、72h的H2228细胞的坏死率分别为0.1%、2.8%、2.0%、0.6%。药物处理后细胞凋亡率与处理前无明显差别（p>0.05）。TAE684不能抑制H2228细胞的增殖。结论：克唑替尼对EML4-ALK阳性细胞株H2228有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度增加而增加。克唑替尼对H2228细胞的半抑制浓度IC50为334.51nM/L。同一药物浓度下,克唑替尼对H2228细胞的抑制作用随时间的延长而降低。克唑替尼对H2228细胞的作用主要为发生早期凋亡,对细胞的坏死无明显作用。TAE684在本实验中未表现出对H2228细胞的抑制作用。

参考文献

[1]苏翠云. 克唑替尼、TAE684对EML4-ALK阳性肺癌细胞株H2228作用的研究[D].广西医科大学,2013.