大鼠主动脉内皮细胞完全培养基的应用

背景^[1-3]

大鼠主动脉内皮细胞完全培养基由精心优化，经过长期测试，本产品可保持大鼠主动脉内皮细胞的生长状态。大鼠主动脉内皮细胞完全培养基已包含大鼠主动脉内皮细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于大鼠主动脉内皮细胞的体外培养。

大鼠主动脉内皮细胞完全培养基成分包含基础培养基、血清、双抗、细胞生长需要的其他添加物，经过近千种各类细胞严格的培养验证。完全培养基包含常规完全培养基、原代细胞完全培养基、细胞系专用培养基，包含细胞生长需要的各种氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐离子等营养物质，可保持细胞的生长状态。

大鼠主动脉内皮细胞完全培养基

心肌主动脉是供给心脏血液的动脉。主动脉内皮细胞分离自正常大鼠心肌主动脉，呈单层扁平分布。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成。它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最少的微血管。

培养操作

1.取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2.待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3.细胞传代

1)吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4)待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

应用^[4][5]

用于血管紧张素（1-7）对ox-LDL诱导的大鼠主动脉内皮细胞LOX-1、ICAM-1、VCAM-1表达的影响研究

在体外培养大鼠主动脉内皮细胞（SVAREC）,通过不同浓度ox-LDL诱导和在ox-LDL基础上加入Ang-（1-7）诱导,观察内皮细胞前后增殖情况及LOX-1、VCAM-1、ICAM-1转录水平的动态改变及Ang-（1-7）保护内皮细胞的可能机制。为更深入理解AS形成的分子机制以及寻找抗AS药物潜在的分子靶点。

方法:1.实验用Cell Counting Kit（CCK-8）检测经ox-LDL组和ox-LDL+Ang-（1-7）组处理后SVAREC细胞的增殖情况。

2. 实验用荧光实时定量聚合酶反应（RT-PCR）法检测经过ox-LDL组和ox-LDL+Ang-（1-7）组处理后的SVAREC细胞LOX-1、VCAM-1、ICAM-1m RNA的表达水平。

结果:1.用Cell Counting Kit（CCK-8）检测结果显示:①ox-LDL组:加入不同浓度的ox-LDL（加入浓度为10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L）和SVAREC细胞分组培养24h,发现其明显抑制SVAREC细胞的生长增殖。在0-100mg/L的浓度范围内,随ox-LDL药物浓度增加,ox-LDL实验组的细胞增殖抑制率逐渐升高,并呈现剂量依赖性关系,与同时间对照组相比较,它们之间的差异有统计学意义（P<0.05）。②ox-LDL+Ang-（1-7）组:实验组在加入终浓度为100mg/L的ox-LDL试剂的基础上,再分别加入Ang-（1-7）浓度为10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和SVAREC细胞分组培养24h后,随着Ang-（1-7）浓度的升高,该组SVAREC细胞的生长抑制率逐渐降低,并呈现剂量依赖性,与同时间对照组相比较,它们之间的差异有统计学意义（P<0.05）。

3. 实验用RT-PCR法检测结果显示:①ox-LDL组:加入不同浓度的ox-LDL（加入浓度为10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L）和SVAREC细胞分组培养24h后。在0-100mg/L的浓度范围内,随着ox-LDL的浓度升高,LOX-1、VCAM-1、ICAM-1m RNA的表达水平升高,与同时间对照组相比较,它们之间的差异有统计学意义（P<0.05）。

②ox-LDL+Ang-（1-7）组:实验组在加入终浓度为100mg/L的ox-LDL试剂的基础上,再分别加入Ang-（1-7）浓度为10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和SVAREC细胞分组培养24h后,随着Ang-（1-7）浓度的升高,随着Ang-（1-7）的浓度升高,LOX-1、VCAM-1、ICAM-1m RNA的表达水平明显降低,与同时间对照组相比较,它们之间的差异有统计学意义（P<0.05）。

参考文献

[1]Pioglitazone Reduces Peritoneal Fibrosis via Inhibition of TGF-β,MMP-2,and MMP-9 in a Model of Encapsulating Peritoneal Sclerosis[J].Funda Saglam,Zahide Cavdar,Sulen Sarioglu,Efsun Kolatan,Gulgun Oktay,Osman Yilmaz,Taner Camsari.Renal Failure.2012(1)

[2]AVE0991,a Nonpeptide Compound,Attenuates Angiotensin II-Induced Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation via Induction of Heme Oxygenase-1 and Downregulation of p-38 MAPK Phosphorylation[J].Chen Sheng-Long,Wu Yan-Xin,Huang Yi-Yi,Fang Ming,He Jian-Gui,Chen Yi-Li,Xia Wen-Jing,Ma Hong,Anderson J.Ferreira.International Journal of Hypertension.2012

[3]Review:Leucocyte–endothelial cell crosstalk at the blood–brain barrier:A prerequisite for successful immune cell entry to the brain[J].J.Greenwood,S.J.Heasman,J.I.Alvarez,A.Prat,R.Lyck,B.Engelhardt.Neuropathology and Applied Neurobiology.2011(1)

[4]Genetic Ace2 Deficiency Accentuates Vascular Inflammation and Atherosclerosis in the ApoE Knockout Mouse[J].Merlin C.Thomas,Raelene J.Pickering,Despina Tsorotes,Audrey Koitka,Karen Sheehy,Stella Bernardi,Barbara Toffoli,Thu-Phuc Nguyen-Huu,Geoffrey A.Head,Yi Fu,Jaye Chin-Dusting,Mark E.Cooper,Chris Tikellis.Circulation Research.2010(7)

[5]杜宁辉.血管紧张素(1-7)对ox-LDL诱导的大鼠主动脉内皮细胞LOX-1、ICAM-1、VCAM-1表达的影响[D].山西医科大学,2015.