单氨氧化酶A(MAOA)重组蛋白的应用

背景^[1-3]

单氨氧化酶A(MAOA)重组蛋白由大肠杆菌表达，经层析纯化获得，纯度95%以上。纯化过程不使用抗体柱亲和层析，避免了产品中掺入无关IgG的可能。具有与抗体特异性结合的能力，蛋白A亲和层析柱已成为应用广泛的纯化抗体的亲和柱产品。

单氨氧化酶A(MAOA)重组蛋白

单氨氧化酶A(MAOA)重组蛋白原核蛋白表达系统以大肠杆菌表达系统为代表，具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点，缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制，如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠，得到具有生物活性的蛋白的几率较小。

酵母蛋白表达系统以甲醇酵母为代表，具有表达量高，可诱导，糖基化机制接近高等真核生物，分泌蛋白易纯化，易实现高密发酵等优点。缺点为部分蛋白产物易降解，表达量不可控。

杆状病毒-昆虫细胞表达系统凭借高特异性高表达水平及翻译后修饰功能，被用作一种表达大规模蛋白的强有力的工具系统，相对来说，操作流程较多，成本偏高。

哺乳动物细胞蛋白表达服务和昆虫细胞表达系统主要优点是蛋白翻译后加工机制最接近体内的天然形式，最容易保留生物活性，缺点是表达量通常较低，稳定细胞系建立技术难度大，生产成本高。

单胺氧化酶(monoamine oxidase,MA O)是生物体内一种十分重要的酶,它在大脑和周围神经组织中催化一些生物体产生的胺,氧化脱氨产生过氧化氢(H2O2).单胺氧化酶A和B基因的克隆清楚地证明了这些酶是由不同的多肽组成的。单胺氧化酶A和B的基因定位于X染色体(Xp11.23),都由15个外显子组成,而且它们的内含子-外显子组织是完全一致的。这些事实表明单胺氧化酶A和B的基因很可能从同一个祖先进化而来.单胺氧化酶A和B具有不同的底物和抑制剂专一性,在生物神经递质代谢和行为方面具有不同的作用。

应用^[4][5]

用于噻吩诺啡低成瘾性与中枢阿片受体、相关脑区单胺递质及突触可塑性的关系探讨研究

考察噻吩诺啡对依赖相关脑区单胺类递质含量及相关酶类活性的影响。本部分拟利用清醒动物脑微透析技术结合高效液相-电化学检测（HPLC-ECD）等方法,以吗啡为阳性对照药物,观察噻吩诺啡急、慢性给药（纳络酮催促戒断）对大鼠蓝斑核、伏隔核、纹状体等药物依赖密切相关脑区单氨类神经递质释放的影响,同时测定递质代谢限速酶单胺氧化酶（Monoamine oxidase,MAO）活性的变化,比较分析噻吩诺啡与吗啡急、慢性给药后不同脑区神经系统的单胺类递质释放和MAO活性的变化,进一步从递质水平探讨噻吩诺啡低依赖性的神经机制。

主要结果与结论:1.在小鼠乙酸扭体模型上,脑室注射κ受体特异性拮抗剂Nor-BNI可以抑制噻吩诺啡的镇痛效果,使其镇痛强度从100%下降至70.94%;在小鼠热辐射甩尾模型上,Nor-BNI使噻吩诺啡的可能镇痛百分率从69.79%下降至41.19%。用μ受体特异性拮抗剂纳洛肼也能部分抑制噻吩诺啡的镇痛效果,使其镇痛强度分别下降38.24%和44.11%,略强于κ受体拮抗剂Nor-BNI。在小鼠躯体依赖模型形成实验中,Nor-BNI+噻吩诺啡组、噻吩诺啡组和噻吩诺啡+吗啡组给与纳洛酮催促以后,均没有产生跳跃等躯体依赖的症状。结果提示,噻吩诺啡镇痛作用与其激动中枢μ和κ受体均有关;但噻吩诺啡的低成瘾性与激动中枢κ受体的关系尚不明确,可能是κ受体在中枢的分布与μ受体不同,不能干预蓝斑核μ受体诱导的躯体依赖效应。

2.噻吩诺啡急、慢性（纳洛酮促催戒断）处理不影响大鼠蓝斑核内去甲肾上腺素（Norepinephrine,NE）的含量,也不影响伏隔核和纹状体内多巴胺（Dopamine,DA）的含量,各脑区神经递质的含量与盐水对照组动物相同（P>0.05）,而吗啡慢性（纳洛酮促催戒断）处理后NE和DA的含量增加是其依赖性的神经基础,这可能是噻吩诺啡依赖性低的神经机制之一。与盐水对照组和吗啡组比较,噻吩诺啡慢性处理大鼠给予纳洛酮催促后纹状体内DA的代谢产物3,4-二羟基苯乙酸（3,4-hihydroxyphenylacetic acid,DOPAC）、高香草酸（Homovanillic acid,HVA）明显升高,同时MAO活性显著增强,提示在该脑区噻吩诺啡可能是通过增强MAO的活性,加速了DA的代谢,阻断了依赖形成神经通路的DA递质含量的显著增加,进而不表现出依赖特性。

参考文献

[1]Local Knockdown of Genes in the Brain Using Small Interfering RNA:A Phenotypic Comparison with Knockout Animals[J].Ali Salahpour,Ivan O.Medvedev,Jean-Martin Beaulieu,Raul R.Gainetdinov,Marc G.Caron.Biological Psychiatry.2007(1)

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[3]Opioid maintenance:a comparative review of pharmacological strategies[J].White,Lopatko.Expert Opinion on Pharmacotherapy.2007(1)

[4]Effects of estradiol benzoate on learning-memory behavior and synaptic structure in ovariectomized mice[J].Xiaohong Xu,Zigui Zhang.Life Sciences.2006(16)

[5]雍政.噻吩诺啡低成瘾性与中枢阿片受体、相关脑区单胺递质及突触可塑性的关系探讨[D].中国人民解放军军事医学科学院,2008.