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Taq酶抗体的介绍

发布日期:2018/12/6 13:23:40

背景[1]

聚合酶链式反应(PCR:Polymerase ChainReaction)是利用DNA 片段两端的两个短的单链引物,应用热稳定的聚合酶,通过双链DNA 模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环,在体外对特定核苷酸片断进行指数级扩增的技术。Taq酶由水栖高温菌(Thermus aquatics)YT1蓖株中分离而得。此菌于1969年由Brock分离自美国黄石公园温泉,作为栖热杆菌的标准菌株,其生长温度为70~75℃,有实验表明Taq 酶活性在热启动以后的半衰期为:97℃时20 分钟、95℃时40 分钟、94℃时60分钟、92℃时90 分钟。

半衰期后PCR 扩增效率迅速降低为接近零。发展至今T a q 酶已可用基因重组的方法生产,Cetus公司生产的商品名为Ampli Taq,其完整基因长2499bp,在大肠杆菌中表达生产,含832个氨基酸。在氨基酸序列上与大肠杆菌DNA 聚合酶Ⅰ有38% 是一致的,包括对dNTP 结合,引物与模板作用区均存在于Taq 酶中。

Taq 酶在PCR 反应中所起的作用是利用其3′→5′聚合酶活性以DNA 为模板,将dNTP 中的脱氧单核苷酸逐个加到3-OH 末端;同时利用其5′→ 3′外切酶活性即能识别和消除错配的引物末端,与复制过程中校正功能有关,又可以从5’端水解核苷酸,还能经过几个核苷酸起作用,切除错配的核苷酸。由此在链延伸过程中实现链替换,并将被替换的探针切断,故可进行定性与定量检测。

简介[1]

Taq Antibody是Hot Start PCR用抗Taq抗体,其与Taq 酶结合后抑制DNA聚合酶活性。使用本制品进行PCR扩增时,高温变性前抗Taq 抗体与Taq 酶结合抑制DNA聚合酶活性,能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。Taq Antibody在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性,DNA聚合酶活性恢复,达到Hot Start PCR效果。

使用Taq Antibody无需特殊的抗Taq 抗体失活处理,可以在常规PCR反应条件下使用。其特点是Hot Start PCR法进行DNA扩增。Taq Antibody与Taq DNA Polymerase混合,25℃,10 min温浴后,在55℃,10 min条件下抑制90%以上的1 U 的Taq DNA Polymerase 活性的Taq Antibody量定义为1 U。

主要参考资料

[1] 李雪, 韩熹, 梁琼麟, 等. Taq 酶对 PCR 定量检测结果的影响[J]. 生命科学仪器, 2006, 4(5): 34-36.