华蟾素的制备方法

背景及概述^[1]

华蟾素来源于中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus Schneider)的皮经过提取分离得到，是我国自行研制的二类新药和国家中 药保护品种，具有调节免疫、抑制肿瘤细胞增殖、抗乙肝病毒的药理作用，在抗肿瘤、治疗慢 性乙型肝炎以及其他疾病的临床治疗上已经得到广泛的应用。华蟾素注射液、口服液、片剂 均为国家中药保护品种，其主要有效成分为吲哚类生物碱、蟾蜍色胺、蟾蜍季胺、蟾蜍噻咛 和脱氢蟾蜍色胺等，其中国家药品标准中将吲哚类生物碱(以5-羟色胺计)含量作为华蟾素 的质量指标。

制备^[1-4]

报道一、

(1)取干蟾皮，洗净后晾干，剪碎，得净蟾皮；

(2)将净蟾皮加入热回流提取罐中，加入75％的乙醇溶液为提取溶剂，蟾皮：溶剂 ＝1:5-10(w/w)，80℃热回流提取3次，合并提取液，得华蟾素醇提液；

(3)将华蟾素醇提液减压浓缩回收乙醇，浓缩温度45-55℃，真空度-0.07～- 0.09MPa，浓缩至浓缩设备受液器无溶剂冷凝时停止浓缩，得华蟾素醇提浸膏；

(4)向华蟾素醇提浸膏加入5倍量(w/w)的蒸馏水，过滤，得华蟾素浸膏水溶液；

(5)华蟾素浸膏水溶液放入膜分离装置中，开泵预平衡，超滤液和截留液返回循环 药液，待药液循环平衡30min，至药液全部滤过，收集超滤液；超滤膜截留分子量为800(g/ mol)，操作压力0.8MPa，分子截留温度30℃；

因为华蟾素中有效成分的(数均)分子量均在800以下，而醇提的杂质主要为蛋白 质、脂肪、多糖等大分子物质，因此选择超滤膜的截留分子量为800；

(6)将步骤(5)所收集的超滤液减压浓缩，真空度-0.08MPa，80℃浓缩收膏，得华蟾 素提取物；

报道二、

取干蟾皮100g，洗净，加水5～6倍，煎煮二次，次45分钟，第二次30分钟，合并 煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.1～1.2(85±5℃)，冷却至40℃，加乙醇使含醇量达 60％，搅匀，静置24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，加乙醇使含醇量达85％，搅匀，静置 48小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得华蟾素提取物。

报道三、

准确称取干蟾皮550g，放入粉碎机中粉碎至全部通过10目药典筛。称取粉碎后的 蟾皮干粉500g置入10L提取釜中，加入5L环己烷，80℃加热回流脱脂提取1h。脱脂后过滤环 己烷，烘干滤饼，得脱脂蟾皮干粉。

将脱脂蟾皮干粉加入到萃取釜中，调节萃取釜压力为34MPa，萃取剂为：二氧化碳∶ 乙醇∶三乙胺＝80∶19∶1；向萃取釜中通入的萃取剂流量为4BV/h，萃取温度为80℃。调节与 萃取釜相通的分离釜温度为60℃，压力为5MPa，萃取时间1小时，得华蟾素浸膏，浸膏经减压 干燥，去除乙醇和三乙胺，得华蟾素提取物。

报道四、

准确称取干蟾皮55g，放入粉碎机中粉碎至全部通过10目药典筛。称取粉碎后的蟾 皮干粉50g置入超声波提取器中，加入10倍量的60％(V/V)乙醇溶液，频率50Hz，提取温度50 ℃，提取30min，得超声波提取液；将超声波提取液煎煮至95℃，维持温度95-100℃之间，提 取30min，得华蟾素提取液；提取液浓缩时真空度控制在-0.06Mpa～-0.08Mpa，温度控制在 75℃～80℃，得华蟾素提取物。

报道五、

取蟾皮100g，剪碎，加入亚临界萃取釜，并通入高纯度氮气进行保护；用高纯度氮 气去除蒸馏水中残留的氧气，形成脱氧蒸馏水；向亚临界萃取釜中加入300g的脱氧蒸馏水 和6g的甲醇；将萃取釜内温度升温至160℃，调节萃取压力为5MPa，萃取时间为30min，冷却 器冷却得到提取液，提取2次，合并提取液，得华蟾素提取液。

参考文献

[1] [中国发明] CN201610834993.1 膜分离制备华蟾素的方法

[2] [中国发明] CN201610781624.0 超临界提取华蟾素的方法

[3] [中国发明] CN201610834994.6 超声波提取华蟾素的方法

[4] [中国发明,中国发明授权] CN201610796860.X 亚临界水提取华蟾素的方法