MV-4-11细胞的应用

背景^[1-3]

MV-4-11细胞来源于一名患有人双表型髓性单核细胞白血病的10岁男孩的外周血。(IL)-3可以独立地支持该细胞长期生长，使用10%FBS培养时则不需要额外添加IL-3。但是，在IL-3和生长因子（GM-CSF）均处于低浓度的情况下，IL-3会抑制MV-4-11细胞的增殖。生长因子会协同GM-CSF促进MV-4-11细胞的增殖，而单独的G-CSF会短暂刺激该细胞系。间接免疫荧光法检测髓性单核细胞抗原CD15，超过96%的该细胞为阳性，40~96%为单核细胞抗原CD4阳性，4-11%为单核细胞抗原CD10阳性。

MV-4-11细胞

MV-4-11细胞培养技巧：

建议平躺着培养该细胞，以增大空气交换面积，且液体高度不要超过3mm，一般T25培养瓶加6-8ml培养基，T75培养瓶加15ml左右培养基即可。培养基尽量现配，配好的培养基两周内用完，因为叶酸不稳定易分解。

一般情况下细胞2-3天换液一次，即使培养基没有变黄。换液时轻轻侧过培养瓶/皿，不要使细胞飘起来，用巴氏吸管轻轻吸取部分上清弃去，补加等体积的新鲜培养基继续培养。或者将全部培养液转移至离心管中，1000rpm离心5min，吸去上清后用新鲜培养轻轻重悬后重新种瓶，重悬时不可吹打过度。细胞对离心和吹打比较敏感，离心和反复吹打会影响细胞状态，建议只在细胞产生大量碎片时才离心清洗。平常换液建议半换，传代可直接补加足够新鲜的培养基后直接分瓶。

细胞团长至肉眼可见，且T25瓶子有几十上百个小团时，细胞数量已经比较多，此时应该2天换液一次。当一个20倍视野有4-5个大细胞团时应该进行传代。传代时加入两倍体积的新鲜培养基后，轻轻吹打细胞团，将大的细胞团打散成小团，但不要剧烈吹打成单细胞悬液，因为单个的细胞是基本没有增殖活力的细胞，然后将混匀的细胞悬液转移至新的培养瓶中。或者将细胞悬液转移至离心管中，1000rpm离心5min后，弃去上清，加入三倍体积的新鲜培养基轻轻重悬后转移至三个新的培养瓶中。

冻存液用50%血清+40%完全培养基+10%DMSO。细胞数量应在0.5-1.0×106/ml为宜。复苏时可适当加大胎牛血清的含量，以使细胞尽快长起来。复苏后细胞需要重新聚团及较长的潜伏期，故复苏时间较长，期间应多加观察，并注意更换培养基，频率为3天一换（半换）。

应用^[4][5]

用于雷公藤甲素对MV4-11细胞的增殖影响及RAS/ERK/MAPK通路相关机制研究

观察雷公藤甲素（TP）对FLT3-ITD突变阳性急性髓系白血病（AML）细胞株MV4-11的增殖抑制和促凋亡作用,并检测RAS/ERK/MAPK通路上相关基因的表达,探讨其可能的抗白血病作用机制,为雷公藤甲素应用于FLT3-ITD突变阳性AML的临床治疗提供理论依据。

方法:采用不同浓度的TP分别处理MV4-11细胞株,在不同的时间点,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖抑制率,用Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞的凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测FLT3、RAS、ERK、FOXM1、c-Myc的mRNA表达水平。

结果:1.MTT法检测并计算不同浓度的TP分别作用于MV4-11细胞24h、48h和72h的增殖抑制率,观察到TP对MV4-11细胞有明显的增殖抑制作用,且随着药物浓度的增加及作用时间的延长,其增殖抑制率呈逐渐增高趋势,存在明显的剂量-时间依赖性。TP作用于MV4-11细胞24h、48h和72h的IC50值分别为56.86、16.59、3.42nmol/L。

2. 流式细胞术检测0、10、20 nmol/L的TP分别作用于MV4-11细胞后,48h的凋亡率分别为（4.47±0.25）%、（17.30±0.56）%、（35.77±0.55）%,72h的凋亡率分别为（6.80±0.66）%、（49.83±0.45）%、（68.90±0.75）%。并观察到随着TP的浓度增高或作用时间延长,凋亡率逐渐增加,呈时间-剂量依赖性。

3. 荧光定量PCR检测0、10、20nmol/L的TP分别作用于MV4-11细胞48h后,FLT3mRNA的表达明显下降,同时RAS、ERK、FOXM1、c-Myc的mRNA的表达均降低,且随着TP药物浓度的增高,各基因的相对表达量均逐渐下降,也存在剂量依赖性。

结论:雷公藤甲素作用于FLT3-ITD突变阳性急性髓系白血病细胞株MV4-11后,能明显抑制MV4-11细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是通过抑制RAS/ERK/MAPK通路相关基因的表达而发挥作用。

参考文献

[1]FOXM1:A key oncofoetal transcription factor in health and disease[J].Laura Bella,Stefania Zona,Gabriela Nestal de Moraes,Eric W.-F.Lam.Seminars in Cancer Biology.2014

[2]Activated ERK/FOXM1 Pathway by Low‐Power Laser Irradiation Inhibits UVB‐Induced Senescence Through Down‐Regulating p21 Expression[J].Qingzhou Ling,Chengbo Meng,Qun Chen,Da Xing.J.Cell.Physiol..2014(1)

[3]FOXM1（Forkhead box M1）in Tumorigenesis[J].Inken Wierstra.Advances in Cancer Research.2013

[4]Cancer genetics and genomics of human FOX family genes[J].Masuko Katoh,Maki Igarashi,Hirokazu Fukuda,Hitoshi Nakagama,Masaru Katoh.Cancer Letters.2013(2)

[5]刘朵平.雷公藤甲素对MV4-11细胞的增殖影响及RAS/ERK/MAPK通路相关机制研究[D].山西医科大学,2017.