P815小鼠肥大细胞瘤细胞的应用

背景^[1-3]

P815小鼠肥大细胞瘤细胞源自DBA/2小鼠的肥大细胞瘤；P815细胞可吞噬乳胶微球，但不吞噬酵母聚糖或卡介苗；P815细胞没有抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。硫酸右旋糖酐、LPS或PPD不能抑制P815细胞生长；P815细胞产生溶菌酶，鼠痘病毒阴性。

P815小鼠肥大细胞瘤细胞

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）在显微镜下确认细胞生长状态时，在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。

应用^[4][5]

用于小鼠肥大细胞瘤P815细胞诱导BALB/c鼠产生特异性抗肿瘤免疫效应研究

采用小鼠肥大细胞瘤P815细胞作为抗原皮下免疫BALB/c小鼠,探讨其是否可诱导BALB/c小鼠产生较强的、针对P815细胞的特异性免疫应答,为肿瘤疫苗设计筛查抗原提供基础。

方法：小鼠肥大细胞瘤P815细胞经尾静脉注入BALB/c小鼠,实验按每只小鼠注入细胞数分为1×107/只组、5×106/只组、2.5×106/只组、1×106/只组、5×105/只组、1×105/只组和溶剂（RPM 11640培养液）对照组,每组6只小鼠。观察各组小鼠的生存状态、体重及肝肺脾（重量、形态、病理）、血涂片、骨髓涂片、白细胞及血小板计数变化。

皮下注入P815细胞对BALB/c小鼠形成肥大细胞瘤/白血病的影响实验分为4组,即P815细胞组、米托蒽醌处理的P815细胞组、L1210细胞组、溶剂对照组,每组6只BALB/c小鼠,分别于双侧臀部皮下注入P815细胞悬液（PBS液配制,0.5ml/只,细胞数5×106/只）、0.1ug/ml米托蒽醌作用12小时的P815细胞悬液（PBS液配制,0.5ml/只,细胞数5×106/只）、L1210细胞悬液（PBS液配制,0.5ml/只,细胞数5×106/只）和PBS液0.5ml/只。一周后,4组小鼠均尾静脉注入P815细胞悬液1.5×106/只（RPMI1640培养基配制,0.15ml/只）。观察各组小鼠生存时间、血涂片、体重及肝肺脾变化,评定各组小鼠形成肥大细胞瘤/白血病情况（观察期限为尾静脉注入P815细胞后3个月）。

皮下注入P815细胞诱导BALB/c鼠产生特异性抗肿瘤免疫效应实验分为2组。随机抽取尾静脉注入P815细胞后未死亡的BALB/c小鼠3只设为实验组,新购买的3只BALB/c小鼠设为对照组。对照组小鼠双侧臀部皮下注入0.5mlPBS液一周后,和实验组小鼠一起,颈椎脱臼法处死。无菌取脾脏,制备脾细胞悬液。乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测两组小鼠脾细胞分别对P815细胞、L1210细胞的杀伤率。观察两组小鼠脾细胞对P815细胞克隆形成的影响。实验各重复3次。

实验数据用均数±标准差（x±s）表示。采用SPSS13.0软件进行统计分析,各组小鼠体重、肝脾肺重、白细胞和血小板计数采用单向方差分析比较,方差齐时用LSD法行多重比较,方差不齐时用校正F值的Welch法检验及Dunnett T3法行多重比较。各组小鼠生存时间用Kaplan-Meier法行生存分析。两组脾细胞对P815细胞、L1210细胞的杀伤率和克隆影响采用两独立样本t检验和两因素两水平析因设计资料的方差分析进行比较。P<0.05表示差异有统计学意义。

参考文献

[1]Activation of natural killer cells by heat shock protein 70[J].Gabriele Multhoff.International Journal of Hyperthermia.2009(3)

[2]Co-expression of P1A35-43/β2m fusion protein and co-stimulatory moleculeCD80 elicits effective anti-tumor immunity in the P815 mouse mastocytoma tumormodel[J].Xingqian Zhang,Wenhan Mei,Leilei Zhang,Hai Yu,Xiaoping Zhao,Xianqun Fan,Guanxiang Qian,Shengfang Ge.Oncology Reports.2009(5)

[3]Increased immunogenicity to P815 cells modified with malondialdehyde and acetaldehyde[J].Michael J.Duryee,Lynell W.Klassen,Bonnie L.Jones,Monte S.Willis,Dean J.Tuma,Geoffrey M.Thiele.International Immunopharmacology.2008(8)

[4]HMGB1:a two-headed signal regulating tumor progression and immunity[J].Lara Campana,Lidia Bosurgi,Patrizia Rovere-Querini.Current Opinion in Immunology.2008(5)

[5]孙茂本.小鼠肥大细胞瘤P815细胞诱导BALB/c鼠产生特异性抗肿瘤免疫效应[D].南方医科大学,2011.