小鼠胸腺上皮细胞的应用

背景^[1-3]

小鼠胸腺上皮细胞分离自胸腺组织采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

胸腺是机体重要的淋巴器官，其功能与免疫紧密相关，是T细胞分化、发育、成熟的场所，还可以分泌胸腺激素及激素类物质，具有内分泌技能的器官。

胸腺上皮细胞和胸腺细胞是胸腺微环境的重要组成部分，其外，胸腺上皮细胞组成了胸腺细胞不同发育阶段的三维结构，根据其在胸腺中位置不同，可分为皮质胸腺上皮细胞和髓质胸腺上皮细胞。

小鼠胸腺上皮细胞

胸腺细胞的发育和成熟是通过在胸腺皮质和髓质上皮细胞的迁移过程中相互作用完成的。此外，胸腺细胞通过皮质胸腺上皮细胞介导的阳性选择和髓质胸腺上皮细胞介导的阴性选择发育为能够识别和耐受自身主要组织相容复合体和自身抗原的成熟T淋巴细胞。

胸腺上皮细胞是构成胸腺微环境的主要成份，其形态、分布和功能多样。表面抗原表达具有高度异质性，与胸腺细胞结合成不同类型复合体，部分胸腺上皮细胞相互排列构成囊泡样结构。电镜观察，可把胸腺上皮细胞分为3-6型，用抗胸腺上皮细胞单克隆抗体荧光染色可把胸腺上皮细胞分为9种类型。

操作方法：

1.取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度

的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2.贴壁细胞消化

1）吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；

3）用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4）待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

3.细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2），多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

应用^[4][5]

用于17β-雌二醇对小鼠胸腺上皮细胞增殖影响的转录组学与蛋白组学分析研究

以小鼠胸腺上皮细胞株MTEC1为研究对象,采用CCK-8、荧光染色、流式细胞术、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹等实验方法及转录组测序和iTRAQ定量蛋白组学技术并对数据进行GO、KEGG、String等生物信息学分析,探讨17β-雌二醇对MTEC1细胞增殖活力、细胞周期、细胞凋亡、转录组表达谱及蛋白质表达谱等影响及机制研究,得到如下结果:（1）17β-雌二醇以剂量依赖的方式影响MTEC1细胞,包括改变细胞形态,抑制细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G2/M期,以及导致细胞凋亡。

（2）17β-雌二醇可引起MTEC1细胞的mRNA表达谱变化,特别引起细胞周期、细胞凋亡基因发生显著性变化,其可能通过p53信号通路调控细胞增殖抑制与细胞凋亡。

（3）17β-雌二醇可导致MTEC1细胞的蛋白质表达谱发生变化,包括GRP78、PDI、Calr等内质网应激相关蛋白在内的61个上调差异表达蛋白和10个下调差异表达蛋白。这些差异表达蛋白主要涉及到细胞增殖、细胞凋亡、免疫反应等细胞生理过程。推测内质网应激通路介导17β-雌二醇诱导MTEC1发生细胞凋亡。

结论:17β-雌二醇可引起MTEC1细胞的基因组和蛋白组表达变化,改变细胞内环境稳态,主要通过p53信号通路和内质网应激通路参与调控细胞增殖活力并诱导细胞凋亡。

参考文献

[1]Stimulation of Fas/FasL‐mediated apoptosis by luteolin through enhancement of histone H3 acetylation and c‐Jun activation in HL‐60 leukemia cells[J].Shih‐Wei Wang,Yun‐Ru Chen,Jyh‐Ming Chow,Ming‐Hsien Chien,Shun‐Fa Yang,Yu‐Ching Wen,Wei‐Jiunn Lee,Tsui‐Hwa Tseng.Molecular Carcinogenesis.2018(7)

[2]Estrogen:The necessary evil for human health,and ways to tame it[J].Seema Patel,Ahmad Homaei,Akondi Butchi Raju,Biswa Ranjan Meher.Biomedicine&Pharmacotherapy.2018

[3]Integrating DNA damage repair with the cell cycle[J].Johanne M Murray,Antony M Carr.Current Opinion in Cell Biology.2018

[4][Corrigendum]Simvastatin inhibits the apoptosis of hippocampal cellsin a mouse model of Alzheimer’s disease[J].Xiaoqin Hu,Chengwei Song,Ming Fang,Chengyan Li.Experimental and Therapeutic Medicine.2018(6)

[5]刘雅梦.17β-雌二醇对小鼠胸腺上皮细胞增殖影响的转录组学与蛋白组学分析[D].华南农业大学,2018.