G蛋白偶联受体结合蛋白O亚基A2抗体的应用

背景^[1-3]

G蛋白偶联受体结合蛋白O亚基A2抗体是一类可以特异性结合G蛋白偶联受体结合蛋白O亚基A2的多克隆抗体，主要用于G蛋白偶联受体结合蛋白O亚基A2的免疫学检测试验。

G蛋白偶联受体结合蛋白O亚基A2

G蛋白偶联受体（G Protein-Coupled Receptors，GPCRs）均是膜内在蛋白（Integral membrane protein），每个受体内包含七个α螺旋组成的跨膜结构域，这些结构域将受体分割为膜外N端（N-terminus），膜内C端（C-terminus），3个膜外环（Loop）和3个膜内环。受体的膜外部分经常带有糖基化修饰。膜外环上包含有两个高度保守的半胱氨酸残基，它们可以通过形成二硫键稳定受体的空间结构。有些光敏感通道蛋白（Channelrhodopsin）和G蛋白耦联受体有着相似的结构，也包含有七个跨膜螺旋，但同时也包含有一个跨膜的通道可供离子通过。

与G蛋白偶联受体相似，脂联素受体（例如ADIPOR1和ADIPOR2）也包含七个跨膜域，但是它们以相反的方向跨于膜上（即N端在膜内而C端在膜外），并且它们也不与G蛋白相互作用。

胞内部分有G蛋白结合区。G蛋白α，β，γ三种亚单位组成的三聚体，静息状态时与GDP结合．当受体激活时GDP－αβγ复合物在Mg2+参与下，结合的GDP与胞质中GTP交换，GTP－α与βγ分离并激活效应器蛋白，同时配体与受体分离。α亚单位本身具有GTP酶活性，促使GTP水解为GDP，在与βγ亚单位形成G蛋白三聚体恢复原来的静息状态。

有三种主要的G蛋白介导的信号通路，由四种通过序列的同源性差异区别开来的G蛋白亚类(Gαs、Gαi/o、Gαq/11和Gα12/13)介导。G蛋白的每一亚类都由多种蛋白质组成，每一种蛋白质都是多种基因或剪接变异的产物，这些基因或剪接变异可能使它们在信号传导特性方面存在细微到明显的差异，但一般来说，它们可以分为这四类。由于各种可能的βγ亚基组合的信号转导特性彼此之间几乎没有根本的区别，所以这些类别是根据它们的α亚基的亚型来定义的。

应用^[4][5]

用于G蛋白偶联雌激素受体介导子宫内膜癌细胞雌激素的非转录效应的研究

G蛋白偶联雌激素受体（G protein coupled estrogen receptor,GPER）是一种膜结合的雌激素结合蛋白,又称G蛋白偶联受体30（G protein coupled receptor30,GPR30）,广泛分布在乳腺、卵巢、胎盘、前列腺和子宫等对雌激素有反应的组织中。GPER作为G蛋白偶联受体,与核雌激素受体（nER）无相关性,与雌激素有较高的亲和力。已经发现,GPER在乳腺癌组织中表达,是乳腺癌进展的指标之一。

GPER在乳腺癌细胞中TGF-β（transforming growth factor-β,转化生长因子β）参与的丝裂酶原活化的蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）信号通路中发挥作用。在雌激素核受体表达缺失、GPER阳性表达的SKBR3乳腺癌细胞中发现,雌激素通过GPER能够活化PI3K/AKT通路,促进肿瘤的增殖与发展。但,GPER抑制ERα阳性的乳腺癌MCF-7细胞的增殖。甲状腺癌和卵巢癌细胞中常见GPER高表达。

以ER阳性的Ishikawa和ER低表达的HEC-1A两种子宫内膜癌细胞系为研究对象,探讨GPER介导子宫内膜癌细胞雌激素的“非转录效应”。

子宫内膜癌细胞中GPER和的ERs表达1目的检测子宫内膜癌细胞中GPER和ERs的表达情况。

方法：1检测Ishikawa和HEC-1A细胞中GPER、AKT、p-AKT、ERα和ERβ的表达和定位Ishikawa和HEC-1A细胞爬片后,采用细胞免疫化学的方法检测Ishikawa和HEC-1A细胞中GPER、ERα和ERβ的表达和定位。Western blot检测Ishikawa和HEC-1A细胞总蛋白中GPER、ERα和ERβ的表达。

结果：Ishikawa和HEC-1A细胞中GPER、AKT、p-AKT、ERα和ERβ的表达和定位Ishikawa和HEC-1A细胞中GPER为细胞膜系统染色,AKT为细胞胞浆和细胞膜染色,p-AKT为细胞胞浆染色,ER a为细胞胞核染色,Ishikawa细胞中ERβ为细胞胞核染色,HEC-1A细胞中ERβ为阴性表达。Western blot结果显示Ishikawa中GPER、ERα和ERβ的表达为阳性,HEC-1A中GPER、AKT、p-AKT和ERα的表达为阳性,ERβ为阴性。

参考文献

[1]Estrogen receptor ligands:a patent review update[J].Ilaria Paterni,Simone Bertini,Carlotta Granchi,Marco Macchia,Filippo Minutolo.Expert Opinion on Therapeutic Patents.2013(10)

[2]GPER-1 Expression Decreases During Breast Cancer Tumorigenesis[J].Tanja Ignatov,Christine Weiß,enborn,Angela Poehlmann,Antje Lemke,Andrzej Semczuk,Albert Roessner,Serban Dan Costa,Thomas Kalinski,Atanas Ignatov.Cancer Investigation.2013(5)

[3]The novel estrogen receptor GPER regulates the migration and invasion of ovarian cancer cells[J].Yan Yan,Huidi Liu,Haixia Wen,Xueli Jiang,Xuefeng Cao,Guangmei Zhang,Guoyi Liu.Molecular and Cellular Biochemistry.2013(1)

[4]Expression of G protein estrogen receptor（GPER）on membrane of mouse oocytes during maturation[J].Yi-Ran Li,Chun-E Ren,Quan Zhang,Ji-Chun Li,Ri-Cheng Chian.Journal of Assisted Reproduction and Genetics.2013(2)

[5]葛新.G蛋白偶联雌激素受体介导子宫内膜癌细胞雌激素的非转录效应的研究[D].郑州大学,2013.