人高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定人血清,血浆及相关液体标本中人高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的水平。

原理：用纯化抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗体，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品浓度。

人高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)ELISA KIT

实验步骤：

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100ul（取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100ul，37℃，60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。

应用^[4][5]

用于甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值（TG/HDL-C）和谷氨酰转移酶（GGT）预测非酒精性脂肪肝（NAFLD）的价值研究

通过分析非酒精性脂肪肝（NAFLD）发病的危险因素,探讨甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值（TG/HDL-C）和谷氨酰转移酶（GGT）对非酒精性脂肪肝的预测价值。

方法：选取无脂肪肝的健康体检者335例作为研究对象,纳入后每年随访一次,连续3年,检测其基线水平及随访时谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、1,-谷氨酰转移酶（GGT）、尿酸（UA）,甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,计算甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值（TG/HDL-C）。

结果（1）3年后发生NAFLD的人群,其基础甘油三酯、TG/HDL-C、γ-谷氨酰转移酶较未发生NAFLD组高（P<0.01）,而体重指数、收缩压、舒张压、谷草转氨酶、尿酸、空腹血糖、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇两组比较无明显差异。

（2）TG/HDL-C、GGT对NAFLD的发生有一定作用,TG/HDL-C以及GGT较甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、尿酸、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、空腹血糖对非酒精性脂肪肝的诊断具有更高的敏感性和特异性,TG/HDL-C的曲线下面积为0.723,面积的95%可信区间是（0.632-0.813）,GGT的曲线下面积为0.753,面积的95%可信区间是（0.661-0.846）,当TG/HDL-C比值为1.3962,而GGT在28.0U/L时对NAFLD的诊断具有一定意义。

结论（1）甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值（TG/HDL-C）和谷氨酰转移酶（GGT）可以预测NAFLD的发生。（2）甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值（TG/HDL-C）和谷氨酰转移酶（GGT）可作为早期诊断NAFLD的参考指标。

参考文献

[1]Association of plasma triglyceride-to-HDL cholesterol ratio with carotid artery intima-media thickness,insulin resistance and nonalcoholic fatty liver disease in children and adolescents[J].L.Pacifico,E.Bonci,G.Andreoli,S.Romaggioli,R.Di Miscio,C.V.Lombardo,C.Chiesa.Nutrition,Metabolism and Cardiovascular Diseases.2014

[2]Metabolic correlation and management strategies of non-alcoholic fatty liver disease:An Asian Indian perspective[J].Atul Luthra,Priyanka Nigam,Anoop Misra.Diabetes&Metabolic Syndrome:Clinical Research&Reviews.2007(4)

[3]β-Lipoprotein-and LDL-associated serumγ-glutamyltransferase in patients with coronary atherosclerosis[J].Aldo Paolicchi,Michele Emdin,Claudio Passino,Evelina Lorenzini,Francesca Titta,Santino Marchi,Gino Malvaldi,Alfonso Pompella.Atherosclerosis.2005(1)

[4]Dietary Composition and Nonalcoholic Fatty Liver Disease[J].Steven Solga,Amir R.Alkhuraishe,Jeanne M.Clark,Mike Torbenson,Ashli Greenwald,Anna Mae Diehl,Thomas Magnuson.Digestive Diseases and Sciences.2004(10)

[5]林仿.甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值（TG/HDL-C）和谷氨酰转移酶（GGT）预测非酒精性脂肪肝（NAFLD）的价值[D].浙江大学,2015.