人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒可以在体外检测样本中人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)的含量。

原理：人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒采用双抗体夹心法测定样本中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)的水平。用已知浓度的待测物质的标准品和未知浓度的样品依次先后加入微孔板，先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，再与亲和素标记过的HRP结合，再经过彻底洗涤后，加入底物A、B，底物在HRP酶的催化下产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中待测物质的含量。

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于TRAIL及其受体TRAIL-R2与TRAIL-R4在人非小细胞肺癌中表达及其临床意义研究

研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necerosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）及其受体TRAIL-R2（DR5）与TRAIL-R4（Dc R2）在非小细胞肺癌（non-small lung cancer,NSCLC）中的表达规律,分析其与非小细胞肺癌（NSCLC,Non-small Cell Lung Cancer）的病理分型、分化水平、临床分期的关系,为临床上早发现,早治疗提供实验室依据,并且初步探讨了TRAIL用于临床的研究。

方法:采用酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测79例NSCLC与80例正常人血清TRAIL的表达水平;采用免疫组化法检测14例NSCLC组织中TRAIL-R2（DR5）与TRAIL-R4（Dc R2）的表达水平。

结果:1、TRAIL在NSCLC血清中的表达明显高于健康人的表达水平（P=0.003<0.05）,差异具有统计学意义,与NSCLC的临床分期具有显著相关性（组间比较P=0.000<0.05）,随着分期的增加,TRAIL的表达水平逐渐降低,与病理分化程度明显相关（P=0.000<0.05）,NSCLC的分化程度越高,TRAIL的表达水平越高,与性别、年龄、病理分型无明显相关性。

2、14例NSCLC组织中,TRAIL-R2的表达率为13/14（93%）,与临床分期、病理分化具有显著相关性,Ⅲ期的表达明显低于Ⅰ期、Ⅱ期的表达（P=0.024<0.05）,高分化的组织TRAIL-R2（DR5）的表达明显高于低分化的表达水平（P=0.002<0.05）,差异具有统计学意义;TRAIL-R4的表达率为13/14（93%）,随着分期的增加,TRAIL-R4（Dc R2）的表达水平升高（P=0.042<0.05）,高分化组织的TRAIL-R4（Dc R2）的表达显著低于低分化组织的表达（P=0.034<0.05）,差异具有统计学意义,TRAIL-R2的表达与TRAIL-R4的表达呈负相关,与病理分型、年龄、性别无显著相关性。

参考文献

[1]Childhood and adolescent cancer statistics,2014[J].Elizabeth Ward,Carol DeSantis,Anthony Robbins,Betsy Kohler,Ahmedin Jemal.CA A Cancer Journal for Clinicians.2014(2)

[2]Caspase-8 and Bid:Caught in the act between death receptors and mitochondria[J].Chahrazade Kantari,Henning Walczak.BBA-Molecular Cell Research.2011(4)

[3]Prognostic significance of tumour necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand（TRAIL）receptor expression in patients with breast cancer[J].Tom M.Ganten,Jaromir Sykora,Ronald Koschny,Emanuela Batke,Sebastian Aulmann,Ulrich Mansmann,Wolfgang Stremmel,Hans-Peter Sinn,Henning Walczak.Journal of Molecular Medicine.2009(10)

[4]Nuclear and cytoplasmic death receptor 5 as prognostic factors in patients with non-small cell lung cancer treated with chemotherapy[J].Katharina Leithner,Elvira Stacher,Robert Wurm,Ferdinand Ploner,Franz Quehenberger,Christoph Wohlkoenig,Zoltán Bálint,Jana Polachova,Andrea Olschewski,Hellmut Samonigg,Helmut H.Popper,Horst Olschewski.Lung Cancer.2008(1)

[5]李海燕.TRAIL及其受体TRAIL-R2与TRAIL-R4在人非小细胞肺癌中表达及其临床意义[D].山西医科大学,2015.