小豆蔻明的制备及检测方法

背景及概述^[1][2]

小豆蔻明(Cardamonin)为黄色针晶，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯，乙醚，稀碱溶液，难溶于水，与醋酸铅反应呈黄色沉淀。小豆蔻明可以明显抑制络氨酸酶的活性，同时可以有效抑制黑色素细胞增殖和黑色素的合成，效果明显超过其他成分。小豆蔻明来源于我国传统的中草药，具有较好的安全性和资源优势，用于皮肤美白和抑制皮肤色素沉着性疾病方面会有很大的市场前景(中国专利申请号200910055818.2)。药理学实验发现二者在抑制血小板聚集、抑制肿瘤形成以及抗炎抑菌方面均有较强活性，并且毒性很低，安全性好。

制备^[1]

小豆蔻明的提取方法目前主要有乙醇提取法、乙醚提取法、丙酮提取法、氯仿提取法等，采用硅胶柱层析。这些提取分离方法得到的小豆蔻明含量较低，得率低，提取时间长，一般作为化学成分研究实验室少量制备方法。史道华等采用95％乙醇浸渍3天，以8倍量乙醇回流2次，每次2小时，减压回收乙醇得600ml浓缩液，浓缩液制成水混悬液后用乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，萃取液减压回收溶剂，浓缩后得340g浸膏，浸膏溶于适量丙酮，拌样，用相当于固体5倍量的硅胶湿法装柱，石油醚-乙酸乙酯系统洗脱，收集各洗脱部分，与对照品在同一薄层板上点样，分别以甲苯-乙酸乙酯-甲醇(15∶4∶1)、三氯甲烷-甲醇(20∶1)展开，紫外灯(波长365nm)下观察，合并于对照品相应位置出现暗斑的馏分，常压浓缩得13g混晶。混晶再过硅胶柱，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯-丙酮系统，浓缩后得5g晶体。取100g凝胶用甲醇溶胀过夜，装柱，晶体溶于甲醇后取20ml上柱，按每份3ml进行收集，薄层(TLC)分析并用标准品对照，合并相同馏分后浓缩，得橙黄色针状晶体4.2g，该方法虽然比丙酮提取法有显著提高，提取率为0.084％，但提取率仍然很低，提取时间长，有机溶剂萃取萃取率低、损失较大。

CN201010235806.0提供一种提取率高、周期短、高纯度的小豆蔻明的提取方法。

技术方案：为了实现上述目的，本发明提供的一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法，具体包括以下步骤：a.提取步骤：取适量草豆蔻种子，粉碎至20-60目，以冷渗、温浸或回流提取法，将草豆蔻种子粉以溶剂提取1-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏；b.有机溶剂萃取步骤：将浸膏用石油醚萃取至萃取液近无色，弃去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；c.分离纯化步骤：将剩余浸膏采用柱层析分离，用水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷或它们的混合溶液洗脱，高效液相色谱监测，收集含小豆蔻明的流出液，此流出液经浓缩后用有机溶剂结晶即可获得高纯度小豆蔻明。本方法提供的小豆蔻明的提取方法和现有技术相比具有以下优点：(1)本发明提供的方法路线设计合理，方法简单易操作；(2)本发明提供的方法周期短、提取率高、产品纯度高；(3)本发明提供的方法中所用溶剂和柱层析填料均可回收循环利用，可降低成本，是一种低成本、循环型的工艺。

检测方法^[2]

而目前常采用于测定草豆蔻主要成分山姜素和小豆蔻明含量的技术方法为：高效液相色谱，薄层色谱法和胶束电动毛细管色谱法。这几种方法中，高效液相色谱法操作条件不易控制且较繁琐，时间过长。薄层色谱法样品用量较大，分 离手续麻烦，分离时间较长，并可能有杂质干扰。而胶束电动毛细管色谱法容易产生气泡，柱子易断，检测灵敏度低，填料种类有限等。为了解决这些问题，就必须改善现有的技术，使其具备操作简单，准确快速可行的方法。并且在将草豆蔻制成现代化中药制剂的生产过程中，快速准确的测定其浓度是非常重要的一个步骤，所以CN201510272183.7提供的方法就可以快速的完成这个检测任务。

技术方案是：一种利用紫外分光光度法测定草豆蔻主要活性成分含量的方法，包括标准样品溶 液的制备，标准曲线线性回归方程的获得，待测样品的制备，紫外检测及浓度的计算，所述 的待测样品的制备，紫外检测及浓度的计算包括如下步骤：a. 待测样品的制备：将草豆蔻样品烘干，分别用粉碎机粉碎后过目筛，精确称取 草豆蔻粉末5g,置于试剂瓶中加95%乙醇定容100mL，超声溶解，再放置过夜，过滤，取续滤液 过微孔滤膜，最后的滤液分装备用；b. 待测样品的紫外检测：采用紫外分光光度法测定草豆蔻溶于95%乙醇的样品提 取液在286nm和346nm处的吸光度；c. 待测样品浓度的计算：将“b”步骤测得的草豆蔻样品溶液分别在286nm和346nm 处的吸光度平均值作为山姜素和小豆蔻明含量的测定值，代入标准曲线线性回归方程，计 算出待测样品中山姜素和小豆蔻明的含量。

主要参考资料

[1] CN201010235806.0 一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法

[2]CN201510272183.7利用紫外分光光度法测定草豆蔻主要活性成分含量的方法