小鼠乳酸ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠乳酸ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠乳酸（Lactate）水平。

原理：用纯化的小鼠乳酸（Lactate）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乳酸（Lactate），再与HRP标记的乳酸（Lactate）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乳酸（Lactate）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠乳酸（Lactate）浓度。

小鼠乳酸ELISA试剂盒

操作步骤：

1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于脂多糖诱导小鼠肺成纤维细胞有氧酵解的机制研究

脂多糖诱导小鼠肺成纤维细胞有氧酵解的生物信息学研究目的:明确脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）对小鼠肺成纤维细胞有氧酵解的诱导作用并使用生物信息学探讨其相关机制。

方法:将培养至4～7代的小鼠肺成纤维细胞接种于六孔培养板,密度1×104/ml。待细胞贴壁后,更换无血清培养基饥饿过夜,采用随机数字表法将其分为4组（n=3）:空白对照组（Con组）,0.5μg/ml LPS组（LPS0.5组）,2μg/ml LPS组（LPS2组）,4μg/ml LPS组（LPS4组）。除Con组外,分别加入以上终浓度的LPS继续培养24小时,收集细胞培养上清液,ELISA法检测不同浓度LPS刺激小鼠肺成纤维细胞24小时后细胞培养上清液中有氧酵解代谢产物乳酸的表达水平;

采用基因芯片技术比较LPS诱导组与空白对照组小鼠肺成纤维细胞基因表达水平,筛选获得两组间差异表达基因,并通过生物信息学分析方法将差异基因在KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）数据库中统计分析,寻找与糖代谢相关显著富集的信号通路以明确LPS诱导小鼠肺成纤维细胞有氧酵解的相关机制。

参考文献

[1]Activation ofα7 nicotinic acetylcholine receptor alleviates Aβ1-42-induced neurotoxicity via downregulation of p38 and JNK MAPK signaling pathways[J].Ke-Wei Chang,Hang-Fan Zong,Kai-Ge Ma,Wan-Ying Zhai,Wei-Na Yang,Xiao-Dan Hu,Jie-Hua Xu,Xin-Lin Chen,Sheng-Feng Ji,Yi-Hua Qian.Neurochemistry International.2018

[2]Targeting ERK,an Achilles’Heel of the MAPK pathway,in cancer therapy[J].Feifei Liu,Xiaotong Yang,Meiyu Geng,Min Huang.Acta Pharmaceutica Sinica B.2018

[3]JNK pathway in osteoarthritis:pathological and therapeutic aspects[J].Hong-xing Ge,Fu-man Zou,Yan Li,An-min Liu,Min Tu.Journal of Receptors and Signal Transduction.2017(5)

[4]PDK1 promotes tumor cell proliferation and migration by enhancing theWarburg effect in non-small cell lung cancer[J].Tao Liu,Honglei Yin.Oncology Reports.2017(1)

[5]邢顺鹏.脂多糖诱导小鼠肺成纤维细胞有氧酵解的机制研究[D].苏州大学,2018.