小鼠白介素13(IL-13)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

小鼠白介素13(IL-13)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白介素13(IL-13)水平。

原理：用纯化的小鼠白介素13(IL-13)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素13(IL-13)，再与HRP标记的白介素13(IL-13)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素13(IL-13)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白介素13(IL-13)浓度。

小鼠白介素13(IL-13)ELISA KIT

操作步骤：

1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于白介素-25通过固有免疫细胞诱导哮喘小鼠气道重塑机制的研究

探究支气管哮喘小鼠白介素-25与TH2型细胞炎性介质之间的相互相互影响,促进哮喘模型小鼠中nuocytes细胞生成增多,在支气管气道重塑中具有重要的作用。

方法：将6-8周龄、雌性,清洁级为SPF级的Balb/C小鼠,按照随机双盲原则分为哮喘组、抗IL-25组和对照组3组,利用雾化器雾化用鸡卵白蛋白建造动物实验模型。哮喘组及抗IL-25组小鼠雾化吸入1%OVA蛋白,对照组小鼠用同体积PBS溶液雾化。同时抗IL-25组经鼻滴入抗IL-25抗体0.5mg/只,哮喘组及对照组经鼻注入等体积的PBS溶液,其他处理同抗IL-25组。

分离、培养nuocytes细胞。伊红-苏木素染色法,观察小鼠肺组织的病理改变,ELISA测定肺泡灌洗液、nuocytes细胞上清液中Ⅱ型细胞因子浓度,免疫组化检测肺组织中α—SMA、collagen-I表达,Western blotting分析小鼠肺组织中α—SMA和collagen-I的表达,RT-PCR检测肺组织中α-SMA和collagen-I mRNA表达。

结果：1.哮喘组小鼠肺泡灌洗液中IL-4、IL-13的浓度高于对照组（P<0.05）,抗IL-25组与对照组IL-4、IL-13的浓度无明显差异（P>0.05）；

2. IL-25组nuocytes细胞上清液中IL-4、IL-13浓度高于对照组（P<0.05）,抗IL-25组与对照组IL-4、IL-13的含量无明显差异（P>0.05）；

3.哮喘组小鼠肺组织α-SMA、collagen-I在蛋白和基因水平的表达均高于对照组（P<0.05）,抗IL-25组与对照组在蛋白和基因表达上无明显差别（P>0.05）。

参考文献

[1]Innate lymphoid cells:New paradigm in immunology of inflammation[J].Vijay Kumar.Immunology Letters.2014(1-2)

[2]Direct comparison of the dynamics of IL‐25‐and‘allergen’‐induced airways inflammation,remodelling and hypersensitivity in a murine asthma model[J].X.J.Yao,K.W.Huang,Y.Li,Q.Zhang,J.J.Wang,W.Wang,J.Liu,Z.Lv,Y.Q.An,Y.Z.Ding,C.J.Corrigan,W.Wang,Y.C.Sun,S.Ying.Clin Exp Allergy.2014(5)

[3]Group 2 Innate Lymphoid Cell Production of IL-5 Is Regulated by NKT Cells during Influenza Virus Infection[J].Stacey Ann Gorski,Young S.Hahn,Thomas J.Braciale.PLOS Pathogens.2013(9)

[4]Critical Role of p38 and GATA3 in Natural Helper Cell Function[J].Jun-ichi Furusawa,Kazuyo Moro,Yasutaka Motomura,Kazuo Okamoto,Jinfang Zhu,Hiroshi Takayanagi,Masato Kubo,Shigeo Koyasu.The Journal of Immunology.2013(4)

[5]刘清发.白介素-25通过固有免疫细胞诱导哮喘小鼠气道重塑机制的研究[D].山东大学,2016.