小鼠第八因子相关抗原(FVIIIAG)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠第八因子相关抗原(FVIIIAG)ELISA试剂盒采用双抗体夹心法检测样本中第八因子相关抗原(FVIIIAG)的含量。

实验原理:用抗小鼠FVIIIAg抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的FVIIIAg会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠FVIIIAg抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠FVIIIAg抗体与结合在包被抗体上的小鼠FVIIIAg结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入发光底物混合液，发光底物在辣根过氧化物酶的催化下发出荧光，用化学发光免疫分析仪测定化学发光值（RLU），FVIIIAg浓度与化学发光值之间呈正相关，通过绘制标准曲线求出标本中FVIIIAg的浓度。

小鼠第八因子相关抗原(FVIIIAG)ELISA

操作步骤：

1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此

重复5次，拍干。

5、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

6、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10分钟.

7、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

应用^[4][5]

用于小柴胡汤对S180荷瘤小鼠肿瘤血管生成及红细胞免疫的影响研究

探讨小柴胡汤（XCHT）对荷瘤小鼠肿瘤血管生成以及红细胞免疫功能的影响。

方法：复制S180荷瘤小鼠模型，通过定量测定第八因子相关抗原（FⅧ—RA）与血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达来分析XCHT对肿瘤血管生成的影响；通过测定荷瘤小鼠红细胞C3b花环结合率（ERC-C3b）及红细胞免疫复合物IC花环率（ERC-IC）来分析XCHT对红细胞免疫功能的影响。

结果：1、XCHT中（P＜0.05），小（P＜0.01）剂量组抑瘤率明显；

2、与模型组比较，XCHT小剂量组微血管密度（MVD）明显下降（P＜0.05）；而对于VEGF三个剂量都有明显抑制作用（P＜0.05）。

3、与模型组比较，XCHT中，小剂量组ERC-C3b明显降低（P＜0.01），而各剂量组ERC-IC都有升高趋势但以中剂量组升高最明显（P＜0.05）。

结论：小柴胡汤对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及肿瘤血管生成具有明显抑制作用，但同时也会导致红细胞免疫功能继发性低下。

参考文献

[1]The effects of carvedilol on cardiac structural remodeling:The roleof endogenous nitric oxide in the activity of carvedilol[J].Jiangbin Chen,Congxin Huang,Bin Zhang,Qiao Huang,Jing Chen,Lin Xu.Molecular Medicine Reports.2013(4)

[2]Propranolol for infantile haemangiomas:insights into the molecular mechanisms of action[J].C.H.Storch,P.H.Hoeger.British Journal of Dermatology.2010(2)

[3]Outpatient treatment of periocular infantile hemangiomas with oral propranolol[J].Kathryn M.Haider,David A.Plager,Daniel E.Neely,Jennifer Eikenberry,Anita Haggstrom.Journal of AAPOS.2010(3)

[4]Infantile Hemangioma[J].Kristen E.Holland,Beth A.Drolet.The Pediatric Clinics of North America.2010(5)

[5]刘超.beta肾上腺素受体在婴幼儿血管瘤发病中的作用研究[D].山东大学,2013.