人D-乳酸(D-LA)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人D-乳酸(D-LA)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试法检测样本中人D-乳酸(D-LA)的含量。

实验原理：往预先包被人D-乳酸（D-LA）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。

颜色的深浅和样品中的人D-乳酸（D-LA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人D-乳酸(D-LA)ELISA试剂盒

操作步骤:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于参苓白术散对脾虚湿盛型IBS-D患者的疗效观察及对肠屏障功能的影响研究

观察脾虚湿盛型IBS-D患者肠屏障功能指标血清二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（D-LA）在参苓白术散治疗前、后的变化,探讨肠屏障功能与IBS-D的关系。

方法:1.选取符合纳入标准的72例脾虚湿盛型IBS-D患者作为研究对象,根据随机数字表法,将其分为中药治疗组36例和西药对照组36例。同时,选取本院体检中心的36例健康体检者,作为健康对照组。

2. 中药治疗组给予参苓白术散煎剂,西药对照组给予匹维溴铵片,两组均服药4周。本研究中,中药治疗组和西药对照组一共有4名患者未完成试验,其结果未计入研究结果。

3. 收集患者性别、年龄、病程等临床资料;观察患者治疗前、后的中医症状积分,记录数据;运用ELISA法测定患者治疗前、后及健康对照组血清DAO、D-LA含量,记录数据。

结果:1.临床资料比较:三组受试者的性别构成、年龄比较,差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性。中药治疗组和西药对照组的病程比较,差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性。

2. 单项症状积分比较:治疗前,中药治疗组和西药对照组的所有单项症状积分比较,P值均>0.05,差异无统计学意义,具有可比性;治疗后,中药治疗组各单项症状积分均有明显下降（P<0.01）,且除腹痛无优势区别,余均优于西药对照组（P<0.05）,在大便频次、大便性状、神疲倦怠上优势尤其明显（P<0.01）。

3. 中医症状总积分比较:治疗前,中药治疗组和西药对照组的的中医症状总积分比较,差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后,两组中医症状总积分与治疗前相比均有显著改善（P<0.01）,且中药治疗组改善的程度大于西药对照组（P<0.05）。

4.中医证候疗效比较:中药治疗组的总有效率为85.29%,西药对照组的总有效率为73.53%,中药治疗组疗效优于西药对照组（P<0.05）。5.血清DAO、D-LA含量比较:中药治疗组、西药对照组治疗前的血清DAO、D-LA含量均明显高于健康对照组（P<0.01）。

参考文献

[1]Associations among gut permeability,inflammatory markers,and symptoms in patients with irritable bowel syndrome[J].Robert J.Shulman,Monica E.Jarrett,Kevin C.Cain,Elizabeth K.Broussard,Margaret M.Heitkemper.Journal of Gastroenterology.2014(11)

[2]Small intestinal permeability is increased in diarrhoea predominant IBS,while alterations in gastroduodenal permeability in all IBS subtypes are largely attributable to confounders[J].Z.Mujagic,S.Ludidi,D.Keszthelyi,M.A.M.Hesselink,J.W.Kruimel,K.Lenaerts,N.M.J.Hanssen,J.M.Conchillo,D.M.A.E.Jonkers,A.A.M.Masclee.Aliment Pharmacol Ther.2014(3)

[3]Review article:evidence for the role of gut microbiota in irritable bowel syndrome and its potential influence on therapeutic targets[J].H.L.DuPont.Aliment Pharmacol Ther.2014(10)

[4]Global Prevalence of and Risk Factors for Irritable Bowel Syndrome:A Meta-analysis[J].Rebecca M.Lovell,Alexander C.Ford.Clinical Gastroenterology and Hepatology.2012(7)

[5]郑宝乃.参苓白术散对脾虚湿盛型IBS-D患者的疗效观察及对肠屏障功能的影响[D].福建中医药大学,2020.