小鼠淋巴瘤细胞的应用

背景^[1-3]

小鼠淋巴瘤细胞是从用9,10-二甲基-1,2-苯并蒽在C57BL小鼠中诱导的淋巴瘤中建立的。能抗0.1 mM氢化可的松，对20 mcg/ml PHA敏感。还有一个亚株(EL4.IL-2,ATCC TIB-181)可以生成高水平的IL-2。检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。

小鼠淋巴瘤细胞胞体直径为12~15μm，圆形或类圆形。胞核椭圆形，常偏一侧。核染色质紧密而均匀，无核仁，胞浆较多，呈透明的淡蓝色，常有少许嗜天青颗粒。

小鼠淋巴瘤细胞

淋巴细胞是免疫反应的核心。根据淋巴细胞的发生来源、形态结构、表面标志和免疫功能等方面的不同，可分为T细胞、B细胞和NK细胞三类。

T淋巴细胞随血循环到胸腺，在胸腺激素等的作用下成熟，而B细胞在骨髓中分化成熟。

当受抗原刺激后，T淋巴细胞即转化为淋巴母细胞，再分化为致敏T淋巴细胞，参与细胞免疫，其免疫功能主要是抗胞内感染、瘤细胞与异体细胞等；

而B淋巴细胞是先转化为浆母细胞，再分化为浆细胞，产生并分泌免疫球蛋白（抗体），参与体液免疫，其功能是产生抗体，提呈抗原，以及分泌细胞内因子参与免疫调节；NK细胞不依赖抗原刺激而自发地发挥细胞毒效应，具有杀伤靶细胞的作用。

应用^[4][5]

用于苏丹Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ诱导小鼠淋巴瘤细胞突变机制的研究

实验阐明苏丹Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ的致突变分子机制

本试验采用“小鼠淋巴瘤细胞L5178Y/TK+/-致突变检测方法”（L5178Y/TK+/-Mouse Lymphoma Mutation Assay,MLA）来获得胸苷激酶基因（tk）突变克隆。

为了检测含功能性tk基因的11号染色体（11b）上DNA断裂情况,挑取对照组和经不同浓度苏丹Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ处理小鼠淋巴瘤L5178Y tk+/--3.7.2细胞得到的tk基因突变克隆,提取DNA,用基于PCR的杂合性缺失（Loss of heterozygosity,LOH）的分析方法考察11号染色体上分布的tk位点的杂合性缺失情况。

最后通过Hoechst33342/PI双荧光活染法检测经苏丹Ⅲ和Ⅳ处理的细胞凋亡情况。

从检测结果来看150μg/mL苏丹Ⅰ诱导的突变体中大克隆和小克隆发生LOH的比例分别为85%（17/20）、95%（19/20）,所有克隆发生LOH的比例为90%（36/40）;150μg/mL苏丹Ⅲ诱导的突变体中大克隆和小克隆发生LOH的比例分别为85.2%（23/27）、100%（15/15）,所有克隆发生LOH的比例为90.5%（38/42）;500μg/mL苏丹Ⅳ号组中大克隆和小克隆发生LOH的比例分别为83.3%（15/18）、90.9%（19/22）,所有克隆发生LOH的比例为85%（34/40）。Hoechst33342/PI双荧光活染法表明在苏丹Ⅲ作用12、24和48小时其凋亡率分别为10.5%、29.5%、52.5%,在苏丹Ⅳ作用12、24和48小时其凋亡率分别为14.5%、28.0%、49.5%,随诱导时间的延长,凋亡率增高,呈时间依赖关系。

参考文献

[1]Detection of Genetic Alterations Induced by Low-Dose X Rays:Analysis of Loss of Heterozygosity for TK Mutation in Human Lymphoblastoid Cells[J].Shigeko Morimoto,Takeshi Kato,Masamitsu Honma,Makoto Hayashi,Fumio Hanaoka,Fumio Yatagai.Radiation Research.2002(5)

[2]Recent advances in the construction of bacterial genotoxicity assays[J].P.David Josephy,Petr Gruz,Takehiko Nohmi.Mutation Research-Reviews in Mutation Research.1997(1)

[3]Genetically engineered mammalian cells and applications[J].Johannes Doehmer,Anneliese Schneider,Markus Faβbender,Volker Soballa,Wolfgang A.Schmalix,Helmut Greim.Toxicology Letters.1995

[4]Molecular mechanisms of spontaneous and induced loss of heterozygosity in human cells in vitro[J].Chuan-Yuan Li,David W.Yandell,John B.Little.Somatic Cell and Molecular Genetics.1992(1)

[5]董韡.苏丹Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ诱导小鼠淋巴瘤细胞突变机制的研究[D].上海交通大学,2009.