肝素锂制备及应用

背景及概述^[1][2]

肝素实际上就是一种含有硫酸基团的粘多糖，发现于肝脏，具有强负电荷、强酸性的特点，主要从猪小肠黏膜或者牛肺中提取。肝素可加快凝血酶失活，提高其亲和力，对血小板的聚集有抑制作用，能增强蛋白C活性，对血管新生的调控作用较强，同时还能起着抗过敏、抗炎的作用。临床上较为常见的肝素盐包括肝素钠、肝素锂，其中由于肝素钠的成本低不利于钠离子检测，应用价值低于肝素锂。

研究表明，肝素锂抗凝血浆与血清中TP、ASO、UA、ALT、Mg、Cl、TC、CRP 检测结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。肝素锂抗凝血浆与血清中HBD、LDH、TBA 检测结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。因此除HBD、LDH、TBA 外，肝素锂抗凝血浆与血清之间的相关性较好。因此，在生活检测中采用肝素锂抗凝血浆代替血清的可行性较高，可将其作为一种重要的检测方法。

应用^[2][3][4]

肝素，在临床血液检验中以钠盐和锂盐为常见，具有独特的应用价值，肝素螯合力低，对水分子运动的影响小，对血液成分干扰少，不影响红细胞体积，不引起溶血，所以在多种以全血或血浆为标本的检验中，推荐使用肝素作为抗凝剂。适用于红细胞脆性试验、血气分析、红细胞压积实验、血流变及急诊生化测定。 在对ph值、血气、电解质和钙离子的检测中，肝素是唯一可以使用的抗凝剂，而肝素锂在检测非锂离子时产生干扰的可能性最小，所以推荐使用肝素锂作为抗凝剂，目前在血液检验中，肝素锂正在逐步取代肝素钠。

1. 用于血液透析后病人生化检验：血液透析后病人的血液样本是很多医院检验科所要面临的一种特殊样本，许多检验人员面对此类样本时常常感到束手无策。这是因为透析病人在血液透析过程中，使用了含有肝素的抗凝药物如低分子肝素钙等，此时由于血液中含有一定量的肝素抗凝药物，血液抽取后置于普通管或分离胶/促凝剂管中均极不容易凝固，不易分离出血清。

有报道称用肝素锂抗凝血浆与血清检测血K，其检测结果分析有偏倚，可能为血样在离心过程中转速过高，纤维蛋白丝网罗的血块中的红细胞受挤压破坏溶血，红细胞内的K 离子释放至血清所致。另血液样本在转运和凝固过程中难免有少量的红细胞破坏，造成血K 的轻度偏高。

另有报导用肝素锂抗凝血浆与血清检测CK-MB、LDH、GLU等结果有显著差异，可能系标本有溶血或放置时间过长血糖分解之故。相反，肝素抗凝剂有不影响细胞体积，不易造成溶血的优点，不需要水浴放置，可直接离心。肝素锂抗凝血浆测得的血K、GLU、LDH等，准确地说更接近病人体内的真实浓度。因此，尽快建立血浆生化检验参考值体系，有助于临床医生对患者病情作出准确判断。

2. 用于常规生化检：研究结果表明，大部分常规生化检验项目可用肝素锂抗凝血浆代替血清，但Glu、K+、Na+、CI-、P3-应建立血浆参考范围，其余项目可用血清参考范围解释血浆检测结果；Lp (a)、PA、HBDH、LDH、CK、CKMB、IgM 等项目不宜用肝素锂抗凝血浆样本进行测定，血浆Lp(a)随着肝素浓度增大而增大。

制备^[2]

肝素锂的制备，目前国内公开了离子平衡交换法制备肝素锂，该法部分工艺环节需要低温条件(10℃以下)操作，对物料及环境温度控制要求较高，硬件设施投入较大；该法在去蛋白工艺环节采用强酸性条件操作(PH1.5)，对肝素活性损失较大(肝素溶液在低PH值环境下很不稳定，极易降解失活)，影响最终活性收率和效价，可操作性不强；该法采用超滤浓缩分离技术，超滤设备昂贵，硬件投入较大；该法采用的离子平衡交换方式，是以高浓度锂离子不断介入的方式来实现肝素钠 向肝素锂的转换，无法保证动态离子平衡转换的充分性和连续稳定性。

国外制备肝素锂均采用离子交换法，该法需要选用精品肝素钠为原料，原料成本高，而且在离子交换过程中可引起PH急 剧下降，严重影响产品的收率和效价，并且交换过程需要在低温提条件下进行，导致肝素锂生产硬件设施投入较大，生产成本较高。

有研究提供一种肝素锂制备方法，以解决上述问题。它是以下列步骤制备：

1）粗品肝素酶解：将粗品肝素钠溶解，调PH值为7.5‑9.0，升温至50‑55℃，加入肝素酶解胰酶，保温4‑5小时，调PH值 9.0‑11，升温至85℃～90℃后，冷却，过滤去除沉淀物，滤液用乙醇沉淀，收集沉淀物(A)；

2）去蛋白：步骤1所得沉淀物(A)用水溶解，搅拌，调 PH至9‑11，加入蛋白质絮凝沉淀剂，搅拌，静置，过滤去除沉淀，收集滤液(D)，滤液(D)调PH至11‑13值，搅拌，静置，过滤去除沉淀，收集滤液(E)，滤液(E)调PH值至中性，用乙醇沉淀，收集沉淀物(B)；

3）氧化脱色：将步骤2所得沉淀物(B)用水溶解，用过氧 化氢氧化24‑48小时，调整PH至10.5‑11.5后，过滤去除沉淀物，收集滤液(F)，滤液(F)调PH值至6.5‑7.5，用乙醇沉淀，收集 沉淀物(C)；

4）树脂交换：将步骤3所得沉淀物(C)用水溶解，加入 LiCl，搅拌溶解，通过树脂柱进行离子交换，收集过柱流出液，得肝素锂溶液；

5）沉淀、脱水、干燥：将步骤4所得肝素锂溶液，过滤，用乙醇沉淀，收集沉淀物(G)，沉淀物(G)脱水，然后真空干 燥，粉碎，得肝素锂精品。

主要参考资料

[1] 韩群. 浅析肝素锂抗凝血浆代替血清用于临床生化检验的可行性[J]. 中国实用医药, 2018 (2018 年 18): 195-197.

[2] CN201210080205.6 肝素锂制备方法

[3] 罗利民, 黄艳平, 毕卫红, 等. 肝素锂抗凝血浆用于血液透析后病人生化检验的评估与应用[J]. 实验与检验医学, 2016, 34(1): 59-61.

[4] 马鸿雁. 肝素锂抗凝血浆用于常规生化检验的评估[J]. 实验与检验医学, 2013, 31(1): 36-38.