替考拉宁的制备

背景及概述^[1][2]

自青霉素的首次应用以来，感染性疾病的治疗取得了长足的进步。然而随着抗菌药物的不断问世及在临床上的广泛应用，病原菌对常用的抗菌药物如β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类及氟喹诺酮类等药物的耐药性也在不断发生变化并日趋严重。如肠球菌、结核分支杆菌、铜绿假单胞菌等对临床上使用的100多种抗生素具有耐药性，已成为目前威胁人类生命的重要细菌杀手。

特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)等病原体感染的治疗已成为全球性的难题之一。耐药菌株的大量出现和传播给临床感染性疾病的治疗带来了很大困难，人类面临对耐药菌的不懈斗争迫在眉睫。因此开发和研制新的抗菌药物已成为全球的热点之一。

替考拉宁(Teicoplanin)是继万古霉素后开发的另一种抗耐药菌糖肽类抗生素，主要对革兰氏阳性需氧菌和厌氧菌具有较强的抗菌活性，特别对MRSA引起的感染有很好的疗效，是目前临床上为数不多的仍具有对多重耐药性金黄色葡萄球菌和肠球菌有活性的药物之一。

与当前国际上公认的抗耐药菌抗生素万古霉素相比，替考拉宁具有与之相似的抗菌活性，相同的作用机理，相近或更优的临床疗效，但毒性更低，特别是更低的肾毒性，不会发生使用万古霉素后引发的“红人综合症”。它具有比万古霉素更方便、快捷的给药途径，可以通过静注或肌注给药，因此更利于门诊治疗和被患者接受。

此外，替考拉宁体内抗菌活性高，半衰期长，具有较持久的抗生素后效应，临床有效率达80％- 90％。用大剂量(400mg/d)治疗MRSA败血症的治愈率可达92％～100％。同时它与β-内酰胺类、氨基糖苷类和碳青霉烯类抗生素联用对绝大多数革兰氏阳性菌有协同杀菌作用。因此，对替考拉宁的研究与开发具有重要的经济价值和应用前景。

结构^[1]

替考拉宁是由Teicoplanin A2(T-A2)五种结构相似的糖肽类化合物(T-A_2-1～T-A_2-5)和去酰基葡糖胺Teicoplanin A3(T-A3)组成的混合物。因T- A2五个组分的混合物成分占产品的90％～95％，替考拉宁又以T- A2命名，其分子结构类似于万古霉素：

由T -A2的结构可见，它含有一个二氯三苯基醚结构单元、三个糖基、多个氨基酸。在它结构中有一个羧基和一个氨基，系两性化合物，其等电点为5.1。经结构比较得知，替考拉宁与其他糖肽类抗生素的主要差别在于它同时具有D-甘露糖和D-葡糖胺两种糖。

由于替考拉宁是两性化合物且结构中含有多个羟基，故易溶于水。另外，它易溶于二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、丙二醇、可溶于甲醇，乙醇等有机溶剂，不溶于无机酸和非极性溶剂。

适应症^[3]

临床主要用于耐青霉素、头孢菌素的革兰阳性菌感染，如心内膜炎、骨髓炎、败血症及呼吸道、泌尿道、皮肤感染等。

规格^[3]

他格适粉针剂：200 mg/瓶。

用法用量^[3]

成人每日1次，每次400 mg静脉注射或肌内注射，首日2次给药；亦可加入生理盐水或5%葡萄糖注射液中不短于30 min静脉滴注；量 800mg/d。2个月以上儿童每次10 mg/kg，前3d剂量每日2次静脉注射，随后6～10 mg/kg，每日1次静脉注射或肌内注射。

药理作用^[3]

本品系一种新型糖肽类抗生素，又称壁霉素，抗菌谱与万古霉素相似。对厌氧及需氧革兰阳性菌如对甲氧西林敏感及耐药的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌、链球菌、肠球菌、单核细胞增多性李斯特菌、细球菌、JK组棒状杆菌和难辨梭状芽胞杆菌及消化球菌均有较强的抗菌活性。对溶血葡萄球菌作用不及万古霉素，对肠球菌作用优于万古霉素，联用利福平可增加疗效。不易透过血-脑脊液屏障。

不良反应^[4]

1. 局部反应：红斑、局部疼痛、血栓性静脉炎。

2. 变态反应：皮疹、瘙痒、发热、支气管痉挛、过敏反应。

3. 胃肠道症状：恶心、呕吐、腹泻。

4. 血液系统：嗜酸性粒细胞增多、白细胞减少、中粒性细胞减少、血小板减少或增多。

5. 肝功能：血清转氨酶和(或)血清碱性磷酸酶增高。

6. 肾功能：血清肌酐短暂升高。

7. 中枢神经系统：头晕、头痛、轻度听力下降、耳鸣和前庭功能紊乱。

注意事项^[5][6]

1. 本品不良反应发生率约10%。皮疹等过敏性反应 2.6%，注射部位疼痛1.7%，药物热0.8%，耳毒性0.3%，肝、肾功能异常分别为1.7%及0.6%。

2. 偶见恶心、呕吐、眩晕、颤抖以及嗜酸粒细胞增多、粒细胞减少、血小板减少和支气管痉挛等。

3. 本品禁用于对万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁等糖肽类过敏者。

4. 肾功能不全者用药时，必须根据肾功能调整剂量。

5. 药物配制：① 配制注射液时缓慢将全部注射用水注入小瓶中，用双手轻轻滚动小瓶直至药粉完全溶解。注意避免产生泡沫，如果出现泡沫，可将溶液静置15 min，待其消泡。配制好的溶液为pH值7.5的等渗液。② 配制好的溶液可直接注射，也可用下述溶剂稀释：0.9%氯化钠注射液、复方乳酸钠溶液(林格-乳酸溶液、哈特曼溶液)和5%葡萄糖注射液。③ 配制好的药液应立即使用，不宜久置。必要时溶液可在4℃条件下保存24 h。

药物相互作用^[3]

使用本品期间同时或相继使用可能有听神经毒性或肾毒性的其他药物，如氨基糖苷类、多黏菌素、二性霉素B、环孢素、顺铂、呋塞米和依他尼酸，可导致毒性增加，用药期间应监测肾功能和听力。

制备^[1][7]

自替考拉宁开发以来，国内外对其分离纯化进行了大量的研究，归纳起来主要有溶媒萃取法、吸附法、离子交换法和色谱法。

1. 溶剂萃取法

鉴于T-A2易溶于水、丙酮水溶液，在甲醇、乙醇等有机溶剂中能溶解的特性，可采用溶剂萃取法从发酵液中提取T-A2。采用非水溶性有机溶剂如氯化的C1-C4碳氢化合物或C4-C6链烷醇萃取T-A2。

发酵液先过滤，滤液用l0％的盐酸(加少量氯化钠)调pH至3.5后用丁醇萃取，再经高速离心、浓缩、冷却沉淀得粗品。其菌丝先水洗，用10％的盐酸调pH为3.5，再用丙酮水溶液(8：2)提取，蒸去丙酮，维持pI-I3.5不变。再经丁醇萃取，离心、浓缩、冷却沉淀出粗品。合并粗品，经HPLC及微生物检定法检测纯度为64.8％。

2.  吸附法

T-A2抑菌的作用原理是它与细胞壁粘肽合成的前体UDP-N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-谷氨酰-L-赖氨酰-D-丙氨酰-D-丙氨酸(UDP-五肽)末端，D-Ala-D-Ala的游离羧基紧密结合，形成T-A2和N、N -二乙酰基-L-赖氨酰-丙氨酰-D-丙氨酸的复合物，干扰了细胞壁的正常合成，从而抑制了细菌的生长。而且实验证明T-A2对以D-Ala-D-A1a为末端的肽有高度的亲和性(Ka=1.5×106)。

根据这一作用机制，通过将二肽D-Ala-D-Ala或多肽X-D-Ala-D-Alaa(×为氨基酸残基)连接于载体上制成有生物选择性的亲和介质，能有效地进行分离纯化T-A2。其亲和载体可采用琼脂、葡聚糖、纤维素、聚苯乙烯或丙烯酸系共聚物等大分子物质，通过交联反应，与D～Ala～D-Ala或X-D-Ala-D-Ala相连形成亲和介质。

也可将带有“手臂”(如6一氨基己酸，N一羟基琥珀酰亚胺或脂肪酸链)的载体与上述肽段相连形成亲和介质，直接将发酵液装入有此类亲和介质的层析柱实验表明此法能有效地分离纯化糖肽类抗生素，尤其是T-A2及衍生物。

3. 离子交换法

从T-A2的化学结构看：它有一个氨基和一个羧基，属两性化合物。因此可用离子交换树脂提取。最早采用阳离子交换树脂(IR120或Dowex50)作纯化载体。后有专利报道，采用聚苯乙烯二乙烯苯磺酸钠DOW [XFS-43278.002]强酸钠盐树脂纯化T-A2。将树脂放入发酵液中，室温下搅拌6h，水洗饱和后的树脂，再把树脂放入pill0.5的氢氧化钠溶液中，维持pH不变，搅拌2h，滤除树脂，再经脱盐、浓缩可制得T-A2成品。

4. 液相色谱法

液相色谱法是一种分离和鉴定化合物的有效方法。它能高效分离纯化很复杂的混合物。利用反相高效液相色谱把由纸色谱和薄层色谱法得到的T-A2成功分离，得到T-A2-l～T-A2-5五个单一组分。

其过程如下：将溶剂萃取法或其它方法得到的T-A2溶解在0.2％ 甲酸铵一乙腈(9：1)中，用lmol/L NaOH调pH7.5，通入制备HPLC柱(硅烷化的硅胶柱)，用10％～20％乙腈和0.2％甲酸铵混合溶液线性梯度洗脱，分步收集，经HPLC分析鉴定，合并其HPLC分布相似的溶液，减压浓缩除去有机溶剂。

浓缩液再上制备HPLC，用50％乙腈洗脱，浓缩洗脱液后，加入丙酮一乙醚(1：1)可沉淀出T-A2-l和T-A'2。T～A2 、T-A2 -4和T-A2 可通过半制HPLC(Whatman Partisil ODS M一9)，用0.2％甲酸铵-乙腈(76：24)解吸，再经脱盐，沉淀可得单一组分。

主要参考资料

[1] 王增霞, 吴明, 蒋宁. 替考拉宁提炼工艺的研究进展[J]. 国外医药: 抗生素分册, 2004, 25(2): 87-91.

[2] 李艳, 刘晓阳. 替考拉宁的临床应用进展及安全性评价[J]. 中国医院药学杂志, 2008, 28(12): 1015-1017.

[3] 常用新药精汇手册

[4] 新编临床药物学

[5] 临床处方药物手册

[6] 护士安全用药手册

[7] 郑波, 李家泰. 糖肽类抗生素替考拉宁的研究进展[J]. 中国临床药理学杂志, 1999, 15(1): 63-67.