重组金黄色葡萄球菌蛋白A抗体的应用

背景^[1-3]

重组金黄色葡萄球菌蛋白A抗体是一类可以特异性结合重组金黄色葡萄球菌蛋白A的多克隆抗体，主要用于重组金黄色葡萄球菌蛋白A的体外免疫学检测。

蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与很多哺乳动物的IgG及少数IgM和IgA结合，主要是与免疫球蛋白重链的Fc区结合。蛋白A可与多种报告分子（荧光染料、酶标记、生物素、胶体金、放射性标记等）偶联而不影响其与抗体结合的活性，这些偶联反应可用于ELISA试验、组织化学、Western Blot等的抗体检测。

金黄色葡萄球菌

将蛋白A与琼脂糖凝胶结合后还可制备用于抗体纯化的亲和填料，可从腹水、血清、细胞培养上清或细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。

重组金黄色葡萄球菌蛋白A抗体制备步骤:

1、制备抗原。

2、选择实验动物。

3、动物免疫。

4、试取血进行测试,看看是否成功免疫。

5、如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清。

6、纯化出抗体。

7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。

应用^[4][5]

用于金黄色葡萄球菌（ATCC6538）蛋白A基因的克隆及应用研究

金黄色葡萄球菌蛋白A（SPA）是上世纪70年代发现的能与多物种抗体Fc端进行结合的菌体蛋白,自发现以来就一直作为重要的抗体纯化层析配体进行研究,目前也是商业化较完善、应用较为广泛的亲和配体。所以能否提高SPA的活性和稳定性,对于抗体药物的生产显得尤为重要。

以ATCC6538株金黄色葡萄球菌的基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆得到了SPA的全长基因1503bp,编码501个氨基酸。经过与标准菌株CowanI的SPA比对,其中成熟蛋白功能区氨基酸序列（1-289）是完全相同的,具有5个IgG结合域,而X区域（305-370）有所不同,所以将这株菌的SPA序列发布到GenBank上供其他研究者参考,检索号为EU695225。

本实验同时构建了两种高效表达载体pHis-SUMO-SPA（全长蛋白）和pHis-SUMO-FSPA（功能区蛋白）,转化入宿主菌Rosetta,将SPA的全长蛋白和功能区片段与SUMO标签进行融合表达,利用SUMO标签的作用提高SPA蛋白的稳定性和活性,经过IPTG诱导和表达条件的摸索,利用AKTA蛋白纯化系统纯化得到了纯度较高的SUMO-SPA和SUMO-FSPA蛋白。

在利用ELISA方法对SUMO-FSPA的抗体结合活性和稳定性进行检测实验中,SUMO-FSPA显示出较好的抗体亲和性和稳定性,并将SUMO-FSPA于活化的琼脂糖连接,连接产物SUMO-FSPA-agarose成功应用于抗体的纯化。这些结果都说明利用SUMO标签与SPA的融合表达可以提高SPA蛋白的稳定性,没有影响与抗体的结合能力,并可以作为模型深入的开发抗体纯化产品。

参考文献

[1]Isolation of a peptide ligand for affinity purification of factor VIII using phage display[J].Brian D.Kelley,James Booth,Molly Tannatt,Qi-Long Wu,Robert Ladner,Jinan Yu,Daniel Potter,Arthur Ley.Journal of Chromatography A.2004(1)

[2]Study of Binding between Protein A and Immunoglobulin G Using a Surface Tension Probe[J].L.Yang,M.E.Biswas,P.Chen.Biophysical Journal.2003(1)

[3]Protein A-induced apoptosis of cancer cells is effected by soluble immune mediators[J].Tanya Das,Gaurisankar Sa,Sreya Chattopadhyay,Prasanta K.Ray.Cancer Immunology,Immunotherapy.2002(7)

[4]Affinity purification of polyclonal antibodies using a new all-D synthetic peptide ligand:comparison with protein A and protein G[J].Antonio Verdoliva,Filomena Pannone,Maria Rossi,Sergio Catello,Vincenzo Manfredi.Journal of Immunological Methods.2002(1)

[5]高学慧.金黄色葡萄球菌（ATCC6538）蛋白A基因的克隆及应用研究[D].东北农业大学,2010.