重组抗体制备的应用

背景^[1-3]

重组抗体制备服务包含重组IgG制备，scFv/Fab制备，双特异性抗体制备，抗体和蛋白纯化服务等服务。

重组抗体，也称为基因工程抗体，是指通过DNA重组技术将抗体相应的基因序列根据需要进行改造和重组，并构建在质粒上，再通过蛋白外源表达技术将构建好的质粒转染/转化入适合的宿主细胞表达获得的抗体。重组抗体很好的解决了动物源抗体引起的人体排斥反应，使得抗体实现人源化，使抗体的效能更为完善。

重组抗体

抗体广泛应用于疾病的诊断和治疗，是研究和应用领域最有价值的研究对象之抗体制备技术经历了三个阶段：

阶段，通过抗原免疫高等动物，从动物的血清中纯化获得抗体，该抗体为多克隆抗体；

第二阶段，杂交瘤技术问世，通过将无限增殖的骨髓瘤细胞与产生抗体的B淋巴细胞融合生产出针对单一抗原决定簇的单克隆抗体；

第三阶段，通过基因工程技术改造动物生产的单克隆抗体的基因序列，使单抗性能更加符合应用需要，并能通过大规模细胞培养获得，该阶段抗体为重组抗体。

重组抗体在人类和动物医学研究中具有巨大潜力；噬菌体展示技术开发的重组抗体具有高度特异性；具有很好的药代动力学，可广泛用于治疗和诊断。如嵌合抗原受体-T细胞技术；scFv已成为该前景的治疗方法的一部分；并有希望获得成功。

应用^[4][5]

用于抗黄曲霉毒素B1荧光重组抗体的制备研究

将绿色荧光蛋白质与抗AFB1单链抗体进行了融合表达,通过检测融合蛋白的荧光强度得到稳定的检测结果,为实现使用免疫学方法对AFB1稳定可靠的检测奠定良好基础。

绿色荧光蛋白质（Green fluorescent protein,GFP）最初是从维多利亚水母中分离得到,由于其荧光稳定、无毒害、易于构建载体等优点常作为报告基因,应用于基因表达及蛋白质定位。抗AFB1单链抗体（Single Chain Fragment Variable,ScFv）是由本研究室前期筛选获得,在以上ScFv及GFP基础上,本研究探索构建了8种不同的重组质粒,同时在大肠杆菌中进行了表达,经过筛选最终获得了既具有抗体活性又有荧光活性的双重活性的融合蛋白质。

本研究首先将筛选得到的抗AFB1的ScFv基因与GFP基因借助于一个linker进行连接,分别组成GFP-linker-ScFv与ScFv-linker-GFP,构建了重组质粒pET22b-ScFv-GFP、pET22b-GFP-ScFv、pET32a-ScFv-GFP、pET32a-GFP-ScFv.将构建成功的重组质粒转化入表达宿主大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中进行原核表达,经Ni-柱纯化后得到目标蛋白质,而后对融合蛋白的活性分别进行酶联免疫法（ELISA）检测与荧光显微镜检测。

结果表明BL21（DE3）/pET22b-ScFv-GFP与BL21（DE3）/pET32a-ScFv-GFP的表达产物抗体效价分别为0.930与0.918,但二者均无荧光活性。而BL21（DE3）/pET22b-GFP-ScFv、BL21（DE3）/pET32a-GFP-ScFv的表达产物正好相反,即有荧光但无抗体活性。全细胞变性蛋白电泳结果表明,这四种重组蛋白在宿主菌内表达后可能发生了降解。

参考文献

[1]Intestinal Trefoil Factor Produced in Escherichia coli Promotes the Healing of Rat Burn-Induced Acute Gastric Mucosal Lesions[J].Yong Sun,Wei Wu,Yong Zhang,Shangjun Lv,Shiliang Wang,Xi Peng.The Journal of Trauma:Injury,Infection,and Critical Care.2008(1)

[2]Efficient Isolation of Soluble Intracellular Single-chain Antibodies using the Twin-arginine Translocation Machinery[J].Adam C.Fisher,Matthew P.DeLisa.Journal of Molecular Biology.2008(1)

[3]Gene expression and function study of fusion immunotoxin anti-Her-2-scFv—SEC2 in Escherichia coli[J].Xu Ming-Kai,Zhang Cheng-Gang.Applied Microbiology and Biotechnology.2006(1)

[4]Expression and purification of a single-chain variable fragment antibody derived from a polyol-responsive monoclonal antibody[J].Jennifer A.Lamberski,Nancy E.Thompson,Richard R.Burgess.Protein Expression and Purification.2005(1)

[5]刘蓉.抗黄曲霉毒素B_1荧光重组抗体的制备[D].江南大学,2010.