支原体培养基基础(含精氨酸)的应用

背景^[1-3]

支原体培养基基础(含精氨酸)是一种用于培养支原体的基础培养基，原理：月示胨、蛋白胨、牛肉浸粉、牛心浸粉、酵母浸粉提供氮源、维生素、矿物质，葡萄糖提供碳源，氯化钠维持均衡的渗透压。

用法：称取本品45克，溶解于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，冷却至室温，无菌操作加入马血清100ml、青霉素8万单位和1%醋酸10ml，混匀，分装无菌试管，放置--20℃保存。

支原体（mycoplasma）是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物，大小为0.1～0.3微米。由于能形成丝状与分枝形状，故称为支原体。支原体广泛存在于人和动物体内，大多不致病，对人致病的支原体主要有肺炎支原体、溶脲脲原体、人型支原体、生殖器支原体等。巨噬细胞、lgG及IgM对支原体均有一定的杀伤作用。

支原体培养基基础(含精氨酸)

支原体革兰染色为阴性，但不易着色，一般用Giemsa染色，染成淡紫色。支原体主要以二分裂方式繁殖，亦可以出芽方式繁殖，分枝形成丝状后断裂呈球杆状颗粒。大部分支原体繁殖速度比细菌慢，适宜生长温度为35℃，最适pH值为7.8～8.0。在固体培养基上培养，形成典型的“荷包蛋”状菌落。支原体抵抗力较弱，对热、干燥敏感，对75%乙醇、煤酚皂溶液敏感，对红霉素、四环素、螺旋霉素、链霉素、卡那霉素等药物敏感，但对青霉素类的抗生素不敏感。

应用^[4][5]

用于牛支原体生长特性及其致病性研究

从牛支原体的生长特性、致病性两个方面,开展了对牛支原体的分离培养、鉴定、生化特性、表性特征、实验动物感染等试验。

并采用PCR、CCU颜色改变单位、显微镜检、分光光度法等方法获取实验相关数据,并分析得出牛支原体各分离株生长特性和致病力强弱,筛选出优势流行菌株为后期ELISA诊断试剂盒的开发、疫苗的研制提供参考依。

为进一步预防和控制牛支原体及其支原体病奠定理论基础。

1牛支原体分离、培养及其鉴定本试验采用改良的支原体培养基对4个省市5个肉牛场中呼吸道症状较重的病牛或死牛的肺脏进行病原分离、培养及纯化,并通过PCR鉴定为牛支原体（Mycoplasma bovis,牛支原体）。

改良的液体培养基比较适合牛支原体的生长繁殖,培养时间相对减少,尤其在传代培养时,平均变色时间仅需24h左右。同时,建立的牛支原体PCR检测方法具有特异性较好、灵敏度较高、且操作简单等特点,其检测结果可以作为临床疾病诊断的参考依据。

2牛支原体生长特性研究采用已纯化鉴定的6个牛支原体分离株（W70株、1738株、Q1株、Q3株、JX02株、677株）,进行生长特性研究。采用革兰氏、姬母萨、迪那氏染色对菌体和菌落进行形态特征的观察。

结果表明：革兰氏染色红色,姬母萨染色紫蓝色；菌体均表现为多形性,以球状和短杆状为主。显微镜检,菌落呈典型的“油煎蛋样”,姬母萨、迪那氏着色效果较好。通过葡萄糖发酵、精氨酸发酵等生化反应观察6个牛支原体分离株纯培养物的生化特性。

参考文献

[1]Vaccines for Mycoplasma Diseases in Animals and Man[J].R.A.J.Nicholas,R.D.Ayling,L.McAuliffe.Journal of Comparative Pathology.2008(2)

[2]Rapid detection of Mycoplasma bovis in milk samples and nasal swabs using the polymerase chain reaction[J].H.Hotzel,K.Sachase,H.Pfützner.Journal of Applied Microbiology.2008(5)

[3]The role of Mycoplasma bovis in bovine respiratory disease outbreaks in veal calf feedlots[J].The Veterinary Journal.2007(1)

[4]Detection of antibodies against the Mycoplasma bovis glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase protein in beef cattle[J].Jose Perez-Casal,Tracy Prysliak.Microbial Pathogenesis.2007(5)

[5]范媛.牛支原体生长特性及其致病性研究[D].西南大学,2011.