麦冬皂苷D的制备和含量检测

背景及概述^[1]

麦冬Ophiopogonjaponicus(Thunb.)Ker‑Gawl.又名沿阶草、书带草、麦门冬，为百合科沿阶草属多年生常绿草本植物，是一味常用于滋阴的中药，始于《神农本草经》，历代本草都有记载。麦冬具有养阴生津，润肺清心。可用于肺燥干咳，虚痨咳嗽，津伤口渴，心烦失眠，内热消渴，肠燥便秘，咽白喉等症。现代研究发现：麦冬含有甾体皂苷、高异黄酮、多糖、氨基酸等成分，药理实验表明麦冬皂苷类成分具有一定的抗心肌缺血、抗心律失常等作用。

麦冬皂苷D：C44H70O16，属于甾体皂苷类，易溶于乙醇和水，不溶于丙酮、石油醚等非极性溶剂。其对心脑血管系统方面具有显著的作用，如蒋风荣等发表的“麦冬皂苷D对过氧化氢造模的HUVEC保护作用机制研究”，该文献明确了麦冬皂苷D可以稳定线粒体膜电位，减少钙离子内流，增加细胞的活力，对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)有一定的保护作用。

制备^[1]

取麦冬干燥药材500g，粉碎过40目筛，加入4L80％的乙醇溶液浸泡0.5小时，再置于微波装置中辐照提取15min，提取温度为60～70℃，微波装置功率设定为200W，提取液浓缩得浸膏68g，加150ml水分散，再加200ml水饱和正丁醇萃取2次，合并萃取液，用300ml丙酮沉淀，过滤，滤液蒸干得麦冬总皂苷11.8g。

将氯仿、甲醇、1％氨水按7∶13∶5的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述黄色粉末用500ml下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2.0ml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为850r/min，通过进样阀进样，每次进样量为150mg，收集流出液，减压蒸干即得麦冬皂苷D2.7g，含量99.3％。

含量检测^[2]

参麦注射液由红参、麦冬制成的复方中药制剂，其中麦冬为主要药味之一，在通常的高效液相分析中，不易得到分离度好的色谱图，难以准确测定，高效液相色谱不能准确测定其中麦冬皂苷D。采用本方法使大部分干扰测定的物质被有效除去，提高了测定的准确性。

1、试药、试剂及仪器

Agilent1260型高效液相色谱仪，配置四元泵，自动进样器，检测器（AltechELSD2000ES），柱温箱。参麦注射液（大理药业股份有限公司提供），麦冬皂苷D对照品（上海源叶生物科技有限公司提供，批号：SM0521KA13，纯度98.2%）；ODS小柱（VARIAN，BONDELUTC18）；甲醇（分析纯，天津化学试剂二厂）；乙腈（色谱纯，Fisher公司），注射用水（自制）。

2、色谱条件

UItimateXB-C18色谱柱（4.6mm×250mm；5-Micron）；柱温30℃，流速1.0ml/min，进样量20μl；检测器：检测器（AltechELSD2000ES），气体流量2.5L/min，漂逸管温度95℃；流动相，水：乙腈(48：52)。

3、对照品溶液的制备

分别精密称取麦冬皂苷D对照品适量，加甲醇溶解，制成浓度为麦冬皂苷D0.2mg/ml对照品溶液。

4、本供试品溶液的制备

精密量取参麦注射液10ml置于分液漏斗中，加水饱和正丁醇萃取4次，每次20ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加水溶解，上处理好的ODS小柱，控制上样和洗脱过程流速为0.5ml/分钟，先用20ml水冲洗，再用50%甲醇水溶液20ml冲洗，最后用65%甲醇水溶液30ml冲洗，收集65%甲醇水溶液，水浴蒸干，残渣用甲醇转移至2ml容量瓶，定容至刻度，摇匀即得。

5、对比供试品溶液的制备

（1）精密量取参麦注射液10ml，水浴蒸干，残渣用甲醇转移至2ml容量瓶，定容至刻度，摇匀即得。

（2）精密量取参麦注射液10ml置于分液漏斗中，加水饱和正丁醇萃取4次，每次20ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣用甲醇转移至2ml容量瓶，定容至刻度，摇匀即得。

6、测定法

分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与供试品20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

参考文献

[1][中国发明]CN201010603888.X一种麦冬皂苷D的提取方法

[2][中国发明,中国发明授权]CN201310378711.8一种对参麦注射液中麦冬皂苷D含量的测定方法