小鼠外周血NK细胞分离液试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠外周血NK细胞分离液试剂盒适用于从动物抗凝血液中分离NK细胞，无菌条件下分离的NK细胞可用于培养。

本分离液为Ficoll、羟乙基淀粉550与泛影酸葡甲胺的混合液。抗凝外周血可在分离液中分层。离心时，在Ficoll、羟乙基淀粉的作用下红细胞与粒细胞聚集并迅速沉降；此时，NK细胞及其他单个核细胞仍处于分离液上层，红细胞污染可忽略不计。大部分血小板可在细胞清洗低速离心过程中去除。其他人及动物多种比重细胞分离液，因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。

小鼠外周血NK细胞

自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。一种稳定表达在NK和LAK细胞表面的LAK-1分子，120kDa，NK细胞在IL-2条件下培养20天LAK-1仍为阳性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的杀伤活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。

自然杀伤细胞刺激因子（natural killer cell stimulatory factor,NKSF)对NK细胞有刺激作用。IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白细胞调节素(leukoregulin,LR)对NK细胞的活化和分化有正调节作用，体外培养时加入上述细胞因子可明显提高NK的杀伤活性。前列腺素(PG)E1、E2、D2和肾上腺皮质激素等对NK细胞的活性有抑制作用。

应用^[4][5]

用于高尿酸状态下NK细胞、iNKT细胞亚群及功能变化的研究

通过建立HUA及痛风的动物模型探讨HUA及痛风的发生是否会影响机体NK细胞及机体炎症因子的水平,并在HUA及痛风患者中动态观察NK细胞及iNKT细胞的变化,以全面了解高尿酸状态对这两种细胞亚群及功能的影响。在此基础上,分析HUA及痛风患者尿酸等代谢指标与NK细胞、iNKT细胞及细胞因子的相关性,进一步了解HUA及痛风与NK细胞、iNKT细胞之间的关系。

方法:1.动物模型研究（1）实验分组:60只C57BL/6雄性小鼠随机分为健康对照组（CS）、高尿酸血症组（HUA）、12小时痛风组（12H）、24小时痛风组（24H）、48小时痛风组（48H）、72小时痛风组（72H）,共6组,每组各10只。

（2）模型建立:每日腹腔注射氧嗪酸钾300mg/kg·bw,连续7日,建立HUA小鼠模型;在HUA模型的基础上,背部皮下注射空气建立气袋囊泡,并于第7天向气囊内注射尿酸盐晶体3mg建立痛风模型。

（3）分离血清,测小鼠血尿酸水平。

（4）气囊膜HE染色观察炎细胞浸润情况。

（5）流式细胞技术检测各组小鼠外周血NK细胞比例、亚群及受体的变化。（6）流式细胞技术检测气囊内NK细胞比例、亚群及受体的变化。

（6）流式细胞技术检测脾中NK细胞比例、亚群及受体的变化。

（8）CBA技术检测血清及气囊灌洗液中IFN-γ、IL-6、IL-10、TNF-α的水平。

参考文献

[1]Effects of febuxostat on serum cytokines IL?1,IL?4,IL?6,IL?8,TNF?αand COX?2[J].Guohua Hao,Wei Duan,Jianping Sun,Jingyao Liu,Bo Peng.Experimental and Therapeutic Medicine.2019(1)

[2]NKG2A,a New Kid on the Immune Checkpoint Block[J].John B.Haanen,Vincenzo Cerundolo.Cell.2018(7)

[3]Levels of Cytokines and Micro RNA s in Individuals With Asymptomatic Hyperuricemia and Ultrasonographic Findings of Gout:A Bench‐to‐Bedside Approach[J].Irving O.Estevez‐Garcia,Selma Gallegos‐Nava,Erika Vera‐Pérez,Luis H.Silveira,Lucio Ventura‐Ríos,Gonzalo Vancini,Cristina Hernández‐Díaz,Fausto Sánchez‐Mu?oz,Martha A.Ballinas‐Verdugo,Marwin Gutierrez,Carlos Pineda,Pedro Rodriguez‐Henriquez,Diana Castillo‐Martínez,Luis M.Amezcua‐Guerra.Arthritis Care&Research.2018(12)

[4]Proteome analysis of human CD56neg NK cells reveals a homogeneous phenotype surprisingly similar to CD56dim NK cells[J].Jenny Voigt,David F.G.Malone,Joana Dias,Edwin Leeansyah,Niklas K.Bj?rkstr?m,Hans‐Gustaf Ljunggren,Lothar Gr?be,Frank Klawonn,Maxi Heyner,Johan K.Sandberg,Lothar J?nsch.European Journal of Immunology.2018(9)

[5]高立超.高尿酸状态下NK细胞、iNKT细胞亚群及功能变化的研究[D].吉林大学,2019.