人BMI-1基因(BMI-1)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人BMI-1基因(BMI-1)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测样本中BMI-1基因含量。

实验原理：往预先包被人Bmi-1基因（BMI-1）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人Bmi-1基因（BMI-1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人BMI-1基因(BMI-1)ELISA试剂盒

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于Bmi-1基因表达与胃癌增殖、浸润、转移相关性的META分析研究

系统评价Bmi-1（B-cell-specific Moloney murine leukemia virus integrationsite-1,B细胞特异性白血病病毒插入位点1）基因表达与胃癌增殖、浸润、转移的相关性。

方法：计算机检索pubMed、维普、CNKI、万方、Scholar Google、Oxford数据库，辅以文献回溯，查找BMI-1基因表达与胃癌增殖、浸润、转移的相关性的病例对照研究，检索时限均为从建库至2014年4月。由2位研究者独立操作，根据纳入和排除标准独立筛选文献、提取资料和评价质量后，采用Review Manager5.2进行Meta分析，相关性评价的指标为肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、病理学分型、远处转移。结果：最终共纳入14篇病例对照研究，全体研究样本量合计1253例。

采用亚组分析法，对采用RT-PCR和免疫组化的研究分别进行独立的亚组分析，组间无异质性则采取合并分析，meta分析结果显示：Bmi-1基因的表达，与肿瘤大小、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、远处转移存在相关性（Z检验，P＜0.0001＜0.00001）。

BMI-1基因阳性表达组胃癌患者对比BMI-1基因阴性表达组肿瘤患者，肿瘤体积增大的风险更大（OR=1.76，95%CI=[1.34,2.31]，Z=4.03，P＜0.0001），有更强的侵袭浸润能力（OR=3.72，95%CI=[2.09,6.63]，Z=4.46，P＜0.00001），病理学分型上为低分化的风险更大（OR=2.36,95%CI=[1.58,3.54],Z=4.16,P＜0.0001）,更容易发生淋巴结转移（OR=3.29,95%=[2.05,5.27],Z=4.94,P<0.00001）,更容易发生远处转移（OR=4.34，95%CI=[2.68,7.05]，Z=5.96，P＜0.00001）。

参考文献

[1]Lapatinib sensitivities of two novel trastuzumab-resistant HER2 gene-amplified gastric cancer cell lines[J].Yukiko Oshima,Harunari Tanaka,Hiroki Murakami,Yuichi Ito,Tomomi Furuya,Eisaku Kondo,Yasuhiro Kodera,Hayao Nakanishi.Gastric Cancer.2014(3)

[2]XRCC1 and XPD genetic polymorphisms and clinical outcomes of gastric cancer patients treated with oxaliplatin-based chemotherapy:a meta-analysis[J].Xin Zhang,Li-Peng Jiang,Yu Yin,Ya-Di Wang.Tumor Biology.2014(6)

[3]Different expression pattern and significance of p14ARF-Mdm2-p53 pathway and Bmi-1 exist between gastric cardia and distal gastric adenocarcinoma[J].Dongying Yao,Yuan Wang,Liying Xue,Hengshu Wang,Jieying Zhang,Xianghong Zhang.Human Pathology.2012

[4]The polycomb group protein BMI1 is a transcriptional target of HDAC inhibitors[J].Prashant V.Bommi,Manjari Dimri,Anagh A.Sahasrabuddhe,Janardan Khandekar,Goberdhan P.Dimri.Cell Cycle.2010(13)

[5]陈书.Bmi-1基因表达与胃癌增殖、浸润、转移相关性的META分析[D].福建医科大学,2014.