志贺氏菌显色培养基的应用

背景^[1-3]

志贺氏菌显色培养基用于食品、病人粪便样品中志贺氏菌的快速检测。志贺氏菌显白色或无色，有些宋内氏志贺氏菌有蓝色中心；大肠杆菌和大肠菌群显绿色或黄色；沙门氏菌显黄色或无色并有黑色中心；其它细菌显蓝绿色或黄色。变形杆菌和铜绿假单胞菌基本不生长；是一种很理想的快速检测培养基。

培养基原理：蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;抑制剂抑制杂菌的生长;酚红是pH指示剂，发酵糖产酸的菌呈黄色;混合色素对应的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团。

志贺氏菌显色培养基配方(每升)：蛋白胨9 g；酵母膏粉3 g；氯化钠5 g；糖类15 g；琼脂15 g；酚红0.1g；混合色素2.1g；抑制剂2 g；添加剂10 g；最终pH 6.8±0.2。

志贺氏菌显色培养基

使用方法：

1、称取51.2 g志贺氏菌显色培养基，加入970 mL蒸馏水或去离子水(可按比例扩大增或缩小)，搅拌加热煮沸至完全溶解(避免过度加热)，无需高压灭菌，冷至50~55℃左右备用;

2、用30 mL蒸馏水或去离子水溶解1瓶添加剂，充分混匀直至溶液变成淡黄色，使用0.45μm或0.22μm的滤膜过滤除菌，无菌操作加入到已冷却至50~55℃的970 mL培养基基础中(可按比例扩大或缩小)，充分混匀后倾注平板备用;

3、待检样品按照相应的标准(GB、SN、FDA等)进行取样及前增菌，挑取一环增菌液划线接种于制备好的该培养基上，于36±1℃培养20~24 h，观察结果，挑取典型或可疑志贺氏菌单菌落进行生化验证试验。

应用^[4][5]

用于水中肠道致病菌活的非可培养状态及致病性的研究

以大肠埃希氏菌、粪肠球菌、痢疾志贺氏菌（血清型1型）为目标菌株,研究细菌在水中处于VBNC状态的诱导因素以控制环境水样的采集、保存和检测方法;研究处于VBNC状态的志贺氏菌的细胞毒性、蛋白表达的差异性以探讨处于该状态细菌蛋白表达特性和分子机制;研究处于VBNC状态的细菌恢复培养方法,以提高其检出的阳性率。

方法1.用低温寡营养、低渗、低pH值、氯处理的方式处理目标菌株,研究肠道细菌在水环境中进入VBNC状态的诱导因素;

2. 用平板计数法测定可培养细菌数,用LIVE/DEAD细菌核酸荧光染色法检测细菌总数和活菌总数;

3. 用痢疾志贺氏菌感染体外培养的Vero非洲绿猴肾细胞、HT-29人结肠癌细胞来判断细菌产毒素情况和细菌的粘附力和侵袭力;

4. 用二维凝胶电泳分离细菌活的非可培养状态下和对数生长期的痢疾志贺氏菌表达的蛋白质,利用MALDI-TOF-MS分析差异蛋白,以探讨处于该状态细菌蛋白表达特性和分子机制;

5.采用升温法、富营养培养法和添加化学物质法对低温寡营养诱导处于VBNC状态的细菌进行复苏培养,以期发现使处于VBNC状态的细菌复苏的条件。

参考文献

[1]LysM,a widely distributed protein motif for binding to（peptido）glycans[J].JanKok.Molecular Microbiology.2008(4)

[2]Resuscitation of Viable But Not Culturable Sinorhizobium meliloti 41 pRP4-luc:Effects of Oxygen and Host Plant[J].Marina Basaglia,Silvana Povolo,Sergio Casella.Current Microbiology.2007(3)

[3]Survival of enterococcal species in aquatic environments[J].Maria del Mar Lleò,Barbara Bonato,Dennis Benedetti,Pietro Canepari.FEMS Microbiology Ecology.2005(2)

[4]Solid phase cytometry as a tool to detect viable but non-culturable cells of Campylobacter jejuni[J].I.Cools,E.D’Haese,M.Uyttendaele,E.Storms,H.J.Nelis,J.Debevere.Journal of Microbiological Methods.2005(2)

[5]孙宗科.水中肠道致病菌活的非可培养状态及致病性的研究[D].中国疾病预防控制中心,2009.