R2A液体培养基的应用

背景^[1-3]

R2A液体培养基用于饮用水中细菌的培养，成分(g/L)：胰蛋白胨：0.25；酸水解酪蛋白；0.5；酵母浸粉：0.5；可溶性淀粉：0.5；磷酸氢二钾：0.3；硫酸镁：0.1；丙酮酸钠：0.3；蛋白胨：0.25；葡萄糖：0.5；pH值7.2±0.2 25℃。

用法：称取本品3.2g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,备用。

R2A液体培养基

培养基为适合生物生长所需要的人工配制的混合物质养料，常指培养微生物或生物细胞组织的养料，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、保藏和酿造、发酵等方面。具体成分根据生物营养需要而不同。

一般含有水、碳水化合物、含氨物质和矿质盐类等。按所用原料不同可分为两类：应用化学药品配成并标明成分的，称为合成培养基或综合培养基，应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配成，称为天然培养基。又因加入或不加入赋形剂可分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。R2A可用作纯化水的微生物限度检查。

纯化水采用的R2A培养基原理如下：

1、R2A培养基可以修复被氯气损伤的细菌，支持耐受氯气的微生物的生长。

2、R2A培养基中的酵母浸出粉、蛋白胨、酸蛋白水解物提供氮源、维生素、生长因子;葡萄糖、为可发酵糖类;可溶性淀粉可以吸收菌在复苏过程产生的有害物质;

3、R2A培养基中的丙酮酸钠可增强细菌的复苏。

4、R2A培养基中的磷酸二氢钾为酸碱缓冲剂，无水硫酸镁提供二价阳离子，琼脂为凝固剂。

应用^[4][5]

用于对虾养殖沉积环境细菌多样性的分子分析与若干可培养技术优化探讨研究

对虾池表层沉积物中的细菌进行富集培养,并运用变性梯度凝胶电泳（DGGE）技术对培养后的细菌多样性变化进行比较和研究;同时,对虾池表层沉积物样品总DNA以及多种固体培养基富集后培养物的总DNA的DGGE图谱中16SrDNA片段的显著条带进行切割、克隆和测序,并进行系统发育分析。

研究取得了以下主要结果:1.对虾池表层沉积物细菌多样性进行分析,得出该沉积环境细菌多样性指数为3.4971,丰度为41,均匀度指数为0.94171;对DGGE图谱上的特征条带进行切割回收和克隆测序后得到了优势菌的信息。测序结果为:17个优势条带分别属于变形菌门、α-变形菌纲、γ-变形菌纲、δ-变形菌纲、ε-变形菌纲、绿弯菌门、放线菌门、厚壁菌门、拟杆菌门和环境样品中的未知菌群等10个类群,其中有15个条带的序列与各个门类中未培养细菌具有大于98%的同源性。

2. 采用直接接种（Ⅰ）和稀释接种（Ⅱ）等2种接种方式、匀速摇动（Y）和间歇扰动（R）等2种培养方式以及2216E、D2216E、VL55、DNB、HM1、HM2、DR2A和R2A等8种液体培养基对虾池表层沉积物细菌进行为期2周的富集培养,结合各样品的DGGE图谱和细菌多样性指数,对接种方式、培养方式的改进效果和各种培养基的使用效果做出评价,结果表明:ⅠY和ⅡR方式可以适用于大多数液体培养基,低营养基质培养基比高营养基质培养基更能获得较多的DGGE条带和较高细菌多样性。

3.采用A2216E、AD2216E、AVL55、ADNB、AHM1、AHM2、ADR2A、AR2A和G2216E、GD2216E、GVL55、GDNB、GHM1、GHM2、GDR2A、GR2A等16种固体培养基对虾池表层沉积物细菌进行为期12周以上的富集培养,菌落计数结果显示:AVL55、GVL55、GDNB、GHM2和GDR2A等培养基在2周和12周的菌落计数结果还有明显的增长;将2周富集培养物DGGE图谱中的显著条带进行切割回收和克隆测序,得到培养后的优势菌落信息。

参考文献

[1]Seasonal and spatial variability of free-living bacterial community composition along an estuarine gradient（Ria de Aveiro,Portugal）[J].Estuarine,Coastal and Shelf Science.2006(1)

[2]Microdiversity of phenol hydroxylase genes among phenol-degrading isolates of Alcaligenes sp.from an activated sludge system[J].Xueli Zhang,Pingping Gao,Qunfang Chao,Linghua Wang,Eric Senior,Liping Zhao.FEMS Microbiology Letters.2004(2)

[3]Cultivation of recalcitrant microbes:cells are alive,well and revealing their secrets in the 21st century laboratory[J].Jared R Leadbetter.Current Opinion in Microbiology.2003(3)

[4]Small-Scale Vertical Distribution of Bacterial Biomass and Diversity in Biological Soil Crusts from Arid Lands in the Colorado Plateau[J].F.Garcia-Pichel,S.L.Johnson,D.Youngkin,J.Belnap.Microbial Ecology.2003(3)

[5]蔡莹.对虾养殖沉积环境细菌多样性的分子分析与若干可培养技术优化探讨[D].厦门大学,2007.