MS751人子宫颈表皮癌细胞的应用

背景^[1-3]

MS751人子宫颈表皮癌细胞是J.Sykes于1974年建立的（参考ATCC HTB-33）。有报告称MS751细胞含有人乳头状瘤病毒18(HPV-18)序列。后来发现MS751细胞包含HPV-45基因组的一部分，而其中E6/E7区域表达呈poly(A)+RNA的形式。

MS751人子宫颈表皮癌细胞

细胞培养步骤:

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备MEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

传代方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

注：次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

应用^[4][5]

用于△Np63α对子宫颈鳞癌细胞上皮—间质转化的调控及其机制研究

探讨p63α在宫颈鳞癌中表达的临床意义

方法：选取128例字宫颈鳞状细胞癌患者,年龄29-66岁,中位年龄45岁,根据1994年FIGO分期,宫颈鳞癌Ⅰ期90例,Ⅱa期38例,所有宫颈鳞癌患者临床诊断均由两名高级职称的妇科医师参照2000年制定的FIGO标准为诊断依据,并且依据术后鳞癌组织病理诊断确诊,术前均为未接受任何辅助治疗并且随访资料完整。

免疫组化法进行以下研究：①检测正常宫颈鳞状上皮组织、宫颈鳞癌组织中β-catenin.Vimentin的表达,进行相关性分析,证实宫颈鳞癌中是否存在EMT现象；

②检测正常宫颈鳞状上皮组织、宫颈鳞癌组织中p63a的表达；

③统计分析宫颈鳞癌p63a的表达与EMT的关系；

④p63α宫颈鳞癌中表达的临床意义。

结果1.β-catenin蛋白与Vimentin蛋白在正常宫颈鳞状上皮以及鳞癌组织中的表达情况正常子宫颈鳞状上皮细胞组织中β-catenin主要表达在细胞膜,在宫颈鳞癌组织表达在细胞膜和细胞质。β-catenin蛋白在正常宫颈鳞状上皮组织的高表达率为82.5%（33/40）、低表达率为12.5%（5/40）,在宫颈鳞癌组织中的高表达率35.9%（46/128）,低表达率为43.0%（55/128）,β-catenin在宫颈鳞癌组织中的表达明显低于正常宫颈组,差异有统计学意义（P<0.05）；Vimentin在正常子宫颈鳞状上皮细胞组织几乎不表达,在宫颈鳞癌组织主要表达在细胞质。在宫颈鳞癌组织中的高表达率28.1%（36/128）,低表达率为38.3%（49/128）,在宫颈鳞癌组织中Vimentin的表达明显高于正常宫颈组,差异有统计学意义（P<0.05）。

2.宫颈鳞癌组织中β-catenin和Vimentin表达的相关性128例宫颈鳞癌组织,18.8%（24/128）的癌组织呈β-catenin高表达,Vimentin呈阴性表达；29.7%（38/128）呈β-catenin和Vimentin共同低表达；14.1%（18/128）呈β-catenin阴性表达,Vimentin高表达,采用Spearman检验β-catenin和Vimentin表达率的相关性,相关系数rs=-0.277,（P值=0.002）,宫颈鳞癌组织中存在EMT现象。

参考文献

[1]Hypoxia promotes vasculogenic mimicry formation by inducing epithelial–mesenchymal transition in ovarian carcinoma[J].Jing Du,Baocun Sun,Xiulan Zhao,Qiang Gu,Xueyi Dong,Jing Mo,Tao Sun,Junyan Wang,Ran Sun,Yanrong Liu.Gynecologic Oncology.2014

[2]Epithelial-mesenchymal transition phenotype is associated with patient survival in small intestinal adenocarcinoma[J].Aeri Kim,Young Kyung Bae,Mi Jin Gu,Jung Yoen Kim,Kyu Yun Jang,Han-Ik Bae,Hee Jin Lee,Seung-Mo Hong.Pathology.2013(6)

[3]The Role of Snail in EMT and Tumorigenesis[J].Yifan Wang,Jian Shi,Kequn Chai,Xuhua Ying,Binhua P.Zhou.Current Cancer Drug Targets.2013(9)

[4]The EMT signaling pathways in endometrial carcinoma[J].Eva Colas,Nuria Pedrola,Laura Devis,Tug?e Ertekin,Irene Campoy,Elena Martínez,Marta Llauradó,Marina Rigau,Mireia Olivan,Marta Garcia,Silvia Cabrera,Antonio Gil-Moreno,Jordi Xercavins,Josep Castellvi,Angel Garcia,Santiago Ramon y Cajal,Gema Moreno-Bueno,Xavier Dolcet,Francesc Alameda,Jose Palacios,Jaime Prat,Andreas Doll,Xavier Matias-Guiu,Miguel Abal,Jaume Reventos.Clinical and Translational Oncology.2012(10)

[5]赵卫东.△Np63α对子宫颈鳞癌细胞上皮—间质转化的调控及其机制研究[D].山东大学,2014.