BT-474 [BT474]人乳腺导管癌细胞的应用

背景^[1-3]

BT-474[BT474]人乳腺导管癌细胞是由E·Lasfargues和W·G·Coutinho从一个实心的乳腺浸润性导管癌中分离到的细胞株。生长培养基 RPMI-1640＋10μg/ml Insulin＋2mM L-glutamine＋20%FBS＋1%P/S；培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃。

BT-474 [BT474]人乳腺导管癌细胞

培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。细胞贴壁生长，生长缓慢。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。细胞长的很慢

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

应用^[4][5]

用于藏药毛诃子化学成分及体外抗癌活性的研究

总结了没食子酸及其酚酸类衍生物、鞣花酸及其酚酸类衍生物、可水解鞣质的质谱解析规律。采用CellTiter-Blue?Cell Viability Assay法,对藏药毛诃子不同极性萃取部位的抗癌活性进行初步评价。

选用人乳腺导管癌细胞（ZR 75-1）、人乳腺导管癌细胞（BT-474）、人乳腺癌细胞（MCF-7）、人乳腺癌细胞（T-47D）、人结肠直肠腺癌细胞（Colo-205）、人结肠腺癌细胞（HT-29）、人结肠癌细胞（SW480）、人子宫内膜腺癌细胞（Hec-1-A）、人前列腺癌细胞（LnCap）和人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）10种癌细胞为模型,比较藏药毛诃子不同极性部位的抗癌活性,结果表明,藏药毛诃子乙酸乙酯萃取部位和水萃取部位抗癌活性较强,乙酸乙酯萃取部位对ZR 75-1、Colo-205、BT-474和T-47D癌细胞的抑制作用最为明显,其半数抑制浓度IC50分别为27.33μg/mL、36.63μg/mL、5 0.67μg/mL和53.47μg/mL;

水萃取部位对T-47D和Colo-205癌细胞的抑制作用最为明显,其半数抑制浓度IC50分别为35.98μg/mL和55.17μg/mL。

选用人乳腺导管癌细胞（ZR75-1）和人结肠直肠腺癌细胞（Colo-205）为模型,对乙酸乙酯萃取部位分离得到的21个单体化合物进行抗癌活性筛选,结果表明诃,子宁、诃子酸、安石榴苷、柯里拉京、五没食子酰葡糖苷5个单体对ZR75-1癌细胞增殖有较强的抑制作用,且半数抑制浓度IC50分别为6.31 mM、7.48 mM、7.95mM、7.71 mM、25.23 mM;

诃子宁、诃子酸、安石榴苷、柯里拉京4个单体对Colo-205癌细胞增殖有较强的抑制作用,且半数抑制浓度IC50分别为6.04 mM、19.69mM、10.88 mM、7.58 mM。采用Annexin V-FITC/PI双标记法及流式细胞术研究检测乙酸乙酯萃取部位对其较为敏感的人乳腺导管癌细胞（ZR75-1）和人结肠直肠腺癌细胞（Colo-205）凋亡的影响,结果表明,毛诃子乙酸乙酯部位作用72 h对ZR75-1和Colo-205细胞具有显著的诱导凋亡作用,且随着药物浓度的增加,细胞总凋亡率逐渐上升。

参考文献

[1]Distribution of Metabolites in Root Barks of Seven Tree Peony Cultivars for Quality Assessment Using NMR-based Metabolomics[J].Pei Wang,Ze-ming Rong,Cui-xia Ma,Xin-feng Zhao,Chao-ni Xiao,Xiao-hui Zheng.Chinese Herbal Medicines.2017(1)

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[3]Anti-Helicobacter pylori compounds from the ethanol extracts of Geranium wilfordii[J].Xi-Quan Zhang,Hong-Mei Gu,Xin-Zhu Li,Zhong-Nan Xu,Yu-Sheng Chen,Yang Li.Journal of Ethnopharmacology.2013(1)

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[5]李师.藏药毛诃子化学成分及体外抗癌活性的研究[D].北京中医药大学,2018.