还原型谷胱甘肽含量试剂盒的应用

背景^[1-3]

还原型谷胱甘肽含量试剂盒测定血清，血浆，组织/细胞裂解物和其他生物体液中的还原型谷胱甘肽含量。

还原型谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒，提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中还原型谷胱甘肽含量。DTNB与还原型谷胱甘肽反应生成黄色产物。在412 nm处有光吸收，与样品中还原型谷胱甘肽的浓度成正比。

谷胱甘肽是甘氨酸、谷氨酸和半胱氨酸组成的天然三肽。在红细胞中，还原型谷胱甘肽是维持血红蛋白处于还原状态的关键，保护细胞免受氧化损伤。GSH是细胞中最重要的抗氧化剂巯基化合物，在细胞抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜转运中起重要作用。还原型与氧化型比值（GSH/GSSG）是细胞氧化还原状态的主要动态指标。测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

还原型谷胱甘肽含量试剂盒

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

2、试剂二放置37℃（哺乳动物）或25℃（一般物种）水浴中保温30min。

3、空白管检测：取微量玻璃比色皿，依次加入20μL蒸馏水，140μL试剂二，40μL试剂三，混匀，放置2min后测定412nm吸光度A1。

4、制作标准曲线

取适当溶液配制浓度为300μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL的标准品（试剂一十倍稀释后进行稀释）。取1.5mL EP管依次加入20μL标准品，140μL试剂二，40μL试剂三，每管混匀后静置2min，检测412nm处

吸光度，吸光度减去空白孔（A1）为横坐标，根据吸光度（x）和浓度（y，μg/mL）做出标准曲线。

5、样本管测定：取微量玻璃比色皿，依次加入20μL样本，140μL试剂二，40μL试剂三，混匀后静置2min检测412nm处吸光度A2，ΔA=A2-A1。

6、酶标仪操作同分光光度计，操作尽量迅速。

应用^[4][5]

用于水稻铬胁迫耐性的遗传分析与还原型谷胱甘肽缓解铬毒害的机理研究

水稻DH群体不同铬耐性株系的鉴定利用权重分析法对铬胁迫下水稻DH群体各株系的生长表现进行了研究,从中鉴定到铬耐性差异显著的株系。在考察的生长性状中,铬胁迫对地上部干重的影响,对叶绿素含量的影响最小。株系117和101的加权综合分值最高,41和49的分值最低。根部铬含量株系117显著大于41,而根部铬累积量两株系恰好相反。

铬胁迫显著抑制两亲本及群体各株系的锌含量,亲本的地上部锌含量下降较多,而根部含量受影响较小。由此可以认为,株系117和101的耐铬性较强,而株系41和49耐铬性较弱。

外源谷胱甘肽对水稻铬毒害的缓解效应与最适浓度筛选研究了外源添加GSH对缓解水稻铬毒害的效应。结果显示,在无铬胁迫条件下,外源GSH并不影响水稻生长和叶绿素含量。在铬胁迫培养液下,外源添加GSH具有缓解铬胁迫抑制水稻生长的作用,且在一定范围内随着GSH浓度的增加,缓解效果增强,在铬离子与GSH浓度比为1：3或1：5时效果较好,当两者的浓度比超过1：10时,水稻根系生长受到抑制。外源GSH提高水稻根的铬含量,但降低地上部的铬含量。结果表明,适宜浓度的GSH可缓解水稻的铬毒害,铬离子与GSH的浓度比为1:3（100μM Cr6+/300μM GSH），具有的缓解作用。

GSH缓解铬胁迫对水稻抗氧化系统、细胞活性和超微结构的影响从抗氧化系统、细胞活性和亚细胞水平上研究了水稻DH株系117和41对铬胁迫的响应和外源GSH的缓解作用。结果表明,铬胁迫下,水稻DH群体的两株系（117和41）的光合色素含量显著下降,而丙二醛含量显著上升；外源添加GSH后,以上两种性状均得到明显恢复。

参考文献

[1]Glutathione in plants:an integrated overview[J].GRAHAMNOCTOR,AMNAMHAMDI,SEJIRCHAOUCH,YIHAN,JENNYNEUKERMANS,BELENMARQUEZ‐GARCIA,GUILLAUMEQUEVAL,CHRISTINE H.FOYER.Plant,Cell&Environment.2012(2)

[2]12-oxo-phytodienoic acid-glutathione conjugate is transported into the vacuole in Arabidopsis.[J].Ohkama-Ohtsu Naoko,Sasaki-Sekimoto Yuko,Oikawa Akira,Jikumaru Yusuke,Shinoda Shoko,Inoue Eri,Kamide Yukiko,Yokoyama Tadashi,Hirai Masami Yokota,Shirasu Ken,Kamiya Yuji,Oliver David J,Saito Kazuki.Plant&cell physiology.2011(1)

[3]Glutathione-Indole-3-Acetonitrile Is Required for Camalexin Biosynthesis in Arabidopsis thaliana（W）（OA）[J].Su,Tongbing,Xu,Juan,Li,Yuan,Lei,Lei,Zhao,Luo,Yang,Hailian,Feng,Jidong,Liu,Guoqin,Ren,Dongtao.Plant Cell.2011(1)

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[5]裘波音.水稻铬胁迫耐性的遗传分析与还原型谷胱甘肽缓解铬毒害的机理研究[D].浙江大学,2012.